外来遺伝子のin situ ハイブリダイゼーション

質問

外来の遺伝子の発現を調べるのに、遺伝子につけたＨＡやＦＬＡＧなどのタグを含むプローブというのは使えますか？
内在の遺伝子と区別したい場合、普通は配列の違う別の種の遺伝子を使って、in situ ハイブリダイゼーションをするのでしょうか？

回答No.2

geneticist12 · ベストアンサー

マウスの事情はよく知らないのですが、、、
私の取り扱っている材料では、ホールマウントで、ISHも抗体染色もごく普通にやられています（マウスに比べればすっと小さいですが）。
実際のところ、核酸プローブの方が浸透しにくいです。ISHでは、プローブの浸透性をよくするため、標本の前処理（プロテアーゼ、界面活性剤、DMSOなど）は不可欠で、プローブの鎖長も長くなりすぎないように調整したりします。抗体染色では、そういうこといっさいなしです（まあ、あれば、Fabフラグメントのほうがいいかなあ、くらいです）。
おそらく、マウスでもホールマウントISHの検出は酵素標識抗体を使うと思うのですが、同じことではないでしょうか。

お礼

そういえば、ＩＳＨも抗体を使うんですね。
マウスの胚なのでホールマウントもできるかもしれないです。
詳しい回答どうもありがとうございました。

回答No.1

geneticist12

HA-tagやFLAG-tagは、塩基配列にして数十bpしかないので、ハイブリで検出するのは難しいと思います。
せっかくエピトープタグがついているのだから、抗体染色でタンパク質を検出する方が、リーズナブルだと思いますが。

お礼

早速の回答、どうもありがとうございました。

また質問になってしまうのですが、抗体染色は小さい組織だけでなく、マウスの胚全体を見ることもできるのでしょうか？
マウスの胚のin situは多く見るのに、抗体染色はあまり見ないので。
抗体だとあまり浸透しないとか、費用の問題でしょうか。