ベストアンサー Whole mount In situ ハイブリダイゼーションについて 2003/06/22 16:56 Whole mount in situ ハイブリダイゼーションとはどのような手法ですか？方法や原理など分かる方教えてください。 みんなの回答 （1） 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー fujishiro ベストアンサー率28% (162/574) 2003/06/24 14:24 回答No.1 普通、in situハイブリといえば組織の切片を使いますが、Wholeではひとつの組織、あるいは胎児などに、クローニングした目的遺伝子のmRNAに標識をつけてしみこませ、その後、発色するなり発光するなりして検出することで、どの組織に目的遺伝子が発現しているかを確認できます。 参考URL： http://www.gtca.kumamoto-u.ac.jp/info/GAIYOU/in-situ.html 質問者 お礼 2003/06/25 09:53 分かりやすい回答ありがとうございました！ 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A 植物の in situ ハイブリダイゼーション 実験で植物のin situ hybridizationを試みています。 しかし、なかなかうまくいかず、発色が確認できません。 経験者の方で、「ここは気をつけろ」みたいな注意点やアドバイスがあれば、 お聞きしたいのですが、よろしくお願いします。 材料はタバコで、標識にはDIGを用いています。 今、ホールマウントin situハイブリダイゼーション でウニの遺伝子 今、ホールマウントin situハイブリダイゼーション でウニの遺伝子の染色やってるのですが RNAプローブを胚に加えて一週間ほどインキュベートした後、MOPS バッファーで何度も洗うのはなぜですか？ それから加えるRNAプローブの濃度が0.1ng/mlだったのですが、もし加えるRNAプローブの濃度を高くしたら（100ng/ul)何が起こるのでしょうか？ 外来遺伝子のin situ ハイブリダイゼーション 外来の遺伝子の発現を調べるのに、遺伝子につけたＨＡやＦＬＡＧなどのタグを含むプローブというのは使えますか？ 内在の遺伝子と区別したい場合、普通は配列の違う別の種の遺伝子を使って、in situ ハイブリダイゼーションをするのでしょうか？ 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた？ OKWAVE コラム in situ ハイブリダイゼーションのプローブ よろしくお願いします。 現在私はマウスの子宮を用いてin situ hybridizationを行っているのですが、自分の手技に問題がないか確認するために、ポジコン用のプローブを探しています。 しかしながら論文検索した限りでは、適当なプローブが見つかりませんでした（写真が不鮮明、条件の記載が不十分等）。 そこでお聞きしたいのですが、上記の様な配列および条件が記載してある論文やＨＰを、どなたかご存知ないでしょうか。 なお手技の確認が目的のため、特に子宮特異的なプローブではなく、例えば筋層特異的とか、上皮特異的なもの等、他の組織と区別が可能なものであれば構わないかと思います。 以上ご面倒ですが、どうかよろしくお願い致します。 in situに用いる固定液について 現在in situ hybridizationを行なおうと思い、色々本を読んでますが、固定液について質問です。 成書には、とにかくRNaseフリーにするために、DEPC処理とか、乾熱滅菌とか色々書いてありますが、経験者によると、実際はそれ程気にしておらず、特にRNaseについて気にしてないようでした。 では組織が持つ内因性のRNaseはどう気をつけてるの？と聞いたら、アルデヒドで固定する為に、気にしないレベルになっていると思う、との答えでした。 さて前置きが長くなりましたが質問です。 普通in situの固定にはホルムアルデヒド固定を行い、架橋結合により併せて酵素も失活出来ると思いますが、アルコール固定のみによる変性固定では、RNaseの失活は期待できないでしょうか？ 質問の意図としては、ホルムアルデヒドを作るのが面倒なのと、架橋によるプローブの浸透が阻害されるような気がするので、アルデヒド固定を省くことが出来れば、いろいろ良いことがあるんじゃないかと思ったのです。 面倒ですが、どなたか示唆を頂ければありがたいです。 in-situの意味を教えてください 半導体の文献等でよく"in situ"という言葉を目にしますが、日本語で表現するとどういうことなのでしょうか？日本語の文献でもよくin-situのまま使用されていますが、何となく分からない状態です。 免疫組織化学法とハイブリダイゼーション 免疫組織化学法をin situ ハイブリダイゼーションと比べまとめたいと思うのですが、両者の違いとはなんでしょうか。 両方使う実験もあるようですが、具体的に免疫組織化学法の長所（欠点）を教えていただけたら幸いです。 In situ disruption in situ disrupyionとは何の目的のために用いる方法のでしょう？ 私の読んだ論文には未知のDNAに既知のDNAを組み入れ、それをプローブに してサザンをしたと書いてあったのですが、サザンが目的の技術なので しょうか？また、この技術は酵母を用いた実験では一般的なのでしょうか？ 今さら周りの人に聞けないin situ probeの疑問 マウス胚でwhole mount in situをやっているのですが、probe合成でいつも疑問に思っていることがあります。それは、ハイブリダイズさせるためにanti sense probeを合成するのですが、なぜsense probeだとRNAにハイブリダイズされないのか？です。 anti sense probeをプラスミドから合成する時は、必ずインサートの5'側を制限酵素処理してリニアライズし、インサートの3'側からSP6とかT3 T7などの酵素でprobeを合成します。 でも逆にインサートの3'側を制限酵素処理してリニアライズ，インサートの5'側から合成したってハイブリダイズするんじゃないかと思ってしまいます。RNAは1本鎖だから。でも実際はそうではありません。 RNAに実際にどのようにprobeが反応するのかイマイチ分かりません。 手元にある本とかネットでも調べましたがありませんでした。 in situを始めて2年になって今さら、周りの人に聞けなくて。どうぞよろしくお願い致します。 “ in situ ” とはどういう意味ですか 科学の雑誌等で、“ in situ ” という言葉を見ますが、これはどういう意味でしょうか。 辞書では、「本来の場所で」、「もとの位置に」などと意味が書いてありますが、その訳語を入れても意味が通りません。 分かりやすく意味を教えていただけないでしょうか。 In situ real time PCRとは？ In situ real time PCRというものを論文で見つけたのですが、これはいったいどういう技術なのでしょうか？ In situ PCRで特異配列を増幅させてそれをプローブで検出するのならば分かりやすいのですが、どうしてそれとreal timeを組み合わせる事が出来るのでしょうか。 私はreal time PCRは遺伝子発現量を調べるためのものだと思っているのですが、それを組織切片で出来るということでしょうか？いまいち想像が出来ません。 どなたかご教授願えませんか？ （ちなみにその論文はアブストしか読めなかったので手技的なことは分かりませんでした） in situ probeの作り方 in situ 用のRNA probe作製についての質問です。 現在行っているprobe作製の手順ですが、 (1)SP6およびT7の配列を組み込んだPCR primerを使って、目的の配列とpolymeraseの配列を含んだPCR産物を得ます。 (2)このPCR産物をin vitro transcriptionのtempleteとして用い、RNAを合成します。 (3)RNA columnにより精製し、最後にgel上でバンドの確認をします。 この最後のgel上での確認の際、バンドが2本見えます。1本は目的のサイズです。スメアではないのでRNAが分解したものではないと思います。 DNAのコンタミかと考え、in vitro transcriptionの試薬を新しくし、再試行しましたが、同じ結果となりました。 どのようにしたらこの問題を解消できるのでしょうか。 in vitro transcriptionの前にgel extractionによりPCR産物は精製しているので、全く異なる配列のRNA産物ではないと思うのですが、このままin situに使えますか？ もし、シグナルが得られても結果に自信が持てない気もしますが。。 よろしくお願いします。 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム in situ closed-loop method について 文献に in situ closed-loop method という言葉がありました。インターネットで調べても、イマイチよくわかりません。どういう方法なのか教えてください。薬学に関する文献です。 サザンハイブリダイゼーションとプローブ 今、RELPマーカーについて学んでいるのですが、 その中でサザンハイブリダイゼーションという言葉が出てきました。 サザンハイブリダイゼーションの原理を理解したくてプローブを調べてもその定義が出てきませんでした。 教えていただけるとうれしいです。 Gal4-UASとin situについて教えてください。 基本的なことなのですが、わからないので教えてください。 あるショウジョウバエの論文で、Gal4-UASを用いてある神経細胞を染色していました。Gal4-A/UAS-mGFPでした。 同時にGal4に用いたエンハンサー(A)のmRNAをin situで観察していました。mGFPの発現部位は、その神経節全体なのですが、in situによる染色はその神経節の先端の細胞群と、少し離れたところの2箇所でした。 Gal4のエンハンサーに用いたAは神経節全体で観察されるのに、なぜmRNAは神経節の一部と違う領域で発現しているのでしょうか。 個人的な理解として、Gal4-UASで発現が見られる部位ではエンハンサーで活性化される遺伝子が必ず発現していると思うのですが・・・ということはmRNAも同時に発現している気がします。 どうぞよろしくお願いいたします。 スクリーニングとハイブリダイゼーションは同じこと？？ 抗体やプローブを用いたスクリーニングというのは、特定のものを選び出すという操作ですよね？既知遺伝子とハイブリダイゼーションする方法と同じことを言っているのですか？？スクリーニングという操作の中の一つとしてハイブリダイゼーションいう方法があるとうことでいいのでしょうか？ 米がブランド米かを判定するのはハイブリダイゼーション？ 図解雑学シリーズの科学捜査にかんする本で、「農水省や秋田県などは、米の特定DNAだけに結合するものを混ぜて、30近い品種を鑑別する技術を開発している」という記述を読みました。これは、ハイブリダイゼーションのことをさしているのかどうかをお尋ねしたいです。この記述は、ブレンド米を純粋なブランド米として販売している業者を摘発するための科学捜査の手法を紹介しているページにあります。別のページで、ハイブリダイゼーションとは2本鎖をほぐして1本にし、別のDNAと結合させてそのDNAの特徴を知る方法、と紹介されていました。が、この米の識別でハイブリダイゼーションを使うのかは行間からは読めませんでした。 この英文の構文、helpの意味がわかりません。 英文の訳を作っています。 Some conditions are known to result from sub-microscopic deletions of the genome, so that a specific request is required before the laboratory can help, by using fluorescent in-situ hybridization. この英文の構造、helpの意味が分かりません。 どなたか教えていただけないでしょうか。 sub-microscopic deletions of the genome：ゲノムの顕微欠失 fluorescent in-situ hybridizationは、蛍光in situハイブリダイゼーションと言われる検査法です。 サザンハイブリダイゼーション 今大学で、ハイブリダイゼーションを勉強している者です。ある本で、サザンハイブリダイゼーションを使って、遺伝子の数を決定できると書かれていたのですが、具体的にはどうやるのでしょうか？いまいちイメージがわかないので、わかる方がいらっしゃいましたら教えて下さい。 遺伝子の染色体上の有無を調べる方法 バイオインフォマティクスではない実験でヒトのある遺伝子が性染色体上(X、Y)にあるかどうかを実験的に調べる方法を教えてください。 in situ hybridizationを用いた方法は知っているので それ以外にあったら教えてください。 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市（長野県）在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル？プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す！格安SIMと端末選びのポイントは？ 友達って必要？友情って何だろう 大震災時の現実とは？私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ！負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
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