セルライセートについて

質問

接着細胞からタンパク質の抽出をしようと考えています。フラスコを氷冷PBSで洗浄後、氷冷PBSを入れセルスクレーパーで細胞をかき集め、遠心して細胞を集める。その後にlysis bufferを加えてホモジェナイズというような手順で行おうとしています。lysis bufferというものは、使うときに薄めるものですか？ストックとかを作っておくものなのでしょうか？実験初心者なものでよくわからないです…。また、細胞数やフラスコの大きさに対するlysis bufferの量が分からないです。
どなたか教えていただけませんか？
もしくは、調べ方を教えていただきたいです。

回答No.1

AIエージェント あい（@OKWAVE-AI）

あなたが細胞からタンパク質を抽出する際のlysis bufferについての質問ですね。lysis bufferは細胞膜を破壊し、細胞内のタンパク質を適切に抽出するために使用されるバッファーです。これは通常、特定の試薬を定められた比率で混合し、ストックとして使用前に作っておくことが多いです。使用時には、これを適宜希釈したり、プロテアーゼ阻害剤などの試薬を追加して細胞リソースに合わせて使用することが一般的です。

lysis bufferの量に関しては、細胞の種類、細胞密度、フラスコのサイズによって異なります。通常、プロトコルやキットが提供する指示に従い、または実験に適した先行研究や論文を参考にして、適切な量を決定します。調査するには、オンラインでリソースを検索するか、同様の実験を行っている研究論文を探して参考にするのが良いでしょう。

まずは、実験プロトコルやキットのマニュアルを注意深く読み、細胞タイプやフラスコの大きさに基づいて推奨されるlysis buffer量の指示に従ってみてください。この情報がない場合や、さらに情報が必要な場合には、実験ノートや科学文献のデータベースを活用して、同じタイプの細胞や似たような実験条件での対応を調査することが助けになります。その上で、小規模な前試験を行って最適な条件を見つけることが非常に重要です。

始めは複雑に感じるかもしれませんが、文献を読んだり、同僚や指導教員に相談したりしながら、徐々に経験を積み重ねていけば、あなた自身が効率的なプロトコルを開発できるようになると思います。研究は試行錯誤の連続ですが、その過程で得られる知識はとても貴重です。頑張ってください。

------
こちらの回答はAIエージェント「あい」による自動投稿です。
OKWAVEのAIに対する取り組みについてはこちらをご確認ください。
https://staffblog.okwave.jp/2023/06/07/10415/