細胞1個あたりの蛋白量／細胞内液の蛋白量

質問

細胞1個あたりの蛋白量（mg protein/cell）の大まかな情報と
その細胞をホモジナイズし遠心分離した上清の蛋白量（mg protein）が細胞の総蛋白量のどの程度含まれているのか教えていただきたいです。
遠心分離により壊れた細胞片などは遠心分離により沈殿するので細胞内の液が上清中に含まれると思います。
細胞の種類により当然変わってくると思いますが目安になる情報がありましたらよろしくお願いします。

回答No.1

Dr_Hyper · ベストアンサー

細胞の種類によりますが、total protein としては動物培養細胞で0.1-5ng /cell程度だと思います。しかしながら上記の答えは、本当に全部のタンパク質を強制的に可溶化させた場合です。つまり細胞の構成タンパク質すべてだと思ってください。ご質問の内容ですと、ホモジナイズしたあと遠心していますのでその条件下での不溶化画分はすべてペレットになります（条件によっては核タンパク質すべても含む）。申し上げておきたい点は実験方法によって上清に回収されるタンパク質量はかなり異なってくるということです。ホモジナイズといっても千差万別でどのようなホモジナイザーを使用したかやそのときに用いている溶液の塩濃度、デタージェント濃度にかなり左右されると御思いください。
細かいことを言えば細胞の状態によってもかなり変化します。（静止期と増殖期など）。

お礼

ご回答ありがとうございました。
動物の腹水細胞を用いていましてその細胞を洗浄後、50mM Tris-HClおよび1mM ジチオトレイトールやプロテアーゼインヒビターとともにホモジナイズしました。ホモジナイザーはPotter-Elvehjem型のホモジナイザーで5,000rpmでホモジナイズしています。遠心分離は5000g×5分程度です。その上清ではどの程度になりそうでしょうか？また、細胞のどの部分が上清に浮遊していると考えますか？

回答No.2

Dr_Hyper

かかれた条件だと核膜は保持されたままなので、主に細胞質分画を得ていると思います。タンパク質のオーダーは前に書いたものとほぼ同じです。あいにく書かれていた細胞を使用したことが無いので具体的な数値は述べることはできません。