Nエチルマレイミドの使い方

質問

どなたか教えていただけると助かります。

現在、培養細胞からタンパク質を抽出し、Nエチルマレイミドを加えたいのですが、その方法が良く分かりません。
滅菌水にNエチルマレイミド粉末を0.5Mとなるように加え、60℃くらいに加熱して溶解した液をストックとして用いています。
これを細胞のlysisバッファーに20mMとなるように加えて、細胞を溶解しているのですが、うまく効果が現れていないようです。

Nエチルマレイミドのストック溶液の作り方や、添加方法などご存知の方がいらっしゃいましたら教えいただけますでしょうか？

よろしくお願いいたします。

回答No.1

noname#71020

Nエチルマレイミド（NEM）を1Mで100%エタノールに溶解（加熱せず）。
lysis bufferにfinalで10mMになるように添加し、細胞を回収します。

溶液はストックできません。用事調整で使用します。

お礼

大変参考になりました。
用事調整なのですね。早速試してみます。
ありがとうございました！