酵母でタンパク質発現しなくなることはあるんですか？？

質問

現在酵母（Pichia pastoris）を使って、タンパク質を発現しています。
１、２回目はクルードの状態で活性を検出できたのですが（精製後は活性が失われました…）、３回目以降で活性を検出することができなくなってしまいました。酵母を長期間保存（プレートで２週間程度）した以外は、全く条件を変えていません。
修論発表が迫っているのでかなり焦っています。
理由がわかる方いらっしゃいましたら、よろしくお願い致します。

回答No.2

ga111

>ga111さんの動物での発現は、プラスミドを使った一過性のものですか？

いいえ。両方です。一過性のは成功する場合も多いと思います。目的遺伝子に依存するようです。

＞そのような場合でも起こりえることなのでしょうか？

酵母はほとんど経験ありませんが、動物細胞と大腸菌でよく起きることですので、、、あまり驚くに値しない現象だと思います。

回答No.1

ga111

フレッシュにトランスフォームしなおすのが常道です。

細胞が嫌う蛋白だと起きることはよくあるかと。動物、もしくは大腸菌で経験あります。

お礼

回答ありがとうございます。
ga111さんの動物での発現は、プラスミドを使った一過性のものですか？

私が使っているのは、酵母のゲノム中のアルコールオキシダーゼプロモーターの下流に目的遺伝子を挿入して、メタノール誘導で発現させるというものなのですが、そのような場合でも起こりえることなのでしょうか？

質問が説明不足で申し訳ありません。