制限酵素サイトの付加方法

質問

遺伝子実験初心者です。

制限酵素サイトを配列に入れたプライマーを使って、両端に制限酵素サイトを含んだcDNAをとってきました。
しかし紆余曲折あり、別の制限酵素サイトにしなくてはならなくなってしまいました。

そこで相談です。

制限酵素サイトを含むcDNAの両端に、別の制限酵素サイトを付加させられるようなアダプターがあると小耳に挟んだんですが、みなさんはどこのメーカーのキット等を使っていますか？調べてみたんですが、キット等についての詳しい説明が見つかりませんでした。

皆さんのご経験などを教えて頂ければ幸いです。

回答No.1

miya_0726

http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.asp?unitid=U100003513

末端が平滑なら、上記のようなものをそのままライゲーションし、該当の制限酵素で切断すればよいでしょう。Taqのような酵素を使用されているのでしたら末端平滑化の後に使用します。
アダプターよりも制限酵素サイトを修正したプライマーを頼んだほうが安いような気もしなくもないですが・・・。

お礼

ありがとうございました！
まさに求めているものそのものでした。

新たにプライマーを用意することも考えたんですが、またcDNAをつってきて、シークエンス確認してサブクローニングして…という手順を考えると、それだけで時間がかかってしまうので。
一応、アダプターと新しいプライマ－の両方を平行して行うつもりです。