制限酵素処理

質問

制限酵素処理が終わって、次にフェノクロorゲル精製をやる場合に関して質問です。もし、終電とかの関係で上記のステップをやる時間がない場合どうされますか？凍らせて帰るのってどうでしょうか？ちなみに、制限酵素サイト付きプライマーでPCRし、PCR産物を制限酵素処理し、ベクターにライゲーションする場合の話です。

回答No.1

geneticist12

オーバーナイトで消化したり、冷蔵保存でもいいと思いますが、それを避けたいという前提で、

エタノール沈殿だけで失活する酵素で、フェノール抽出による精製を必要としないとき→エタノールと塩を加えたエタノール沈殿の条件で保存。

フェノール抽出が必要なとき→フェノール抽出だけやって、上記の条件で保存。または、EDTA,SDSなどを加えて反応をとめて保存。

反応液をそのままゲル抽出にもって行く場合→EDTA,SDS入りのローディングバッファを加えて保存。

冷凍でもいいですが、後で融かすのも面倒だし、長期保存でもないのに凍らせるのは抵抗があります。