クローニング

質問

現在遺伝子クローニングをしていて、遺伝子の部分配列（５００ｂｐ）のクローニングに成功しました。今全長をとろうとしているのですが、自分でふと思いついた方法にみなさん意見ください。その方法とは
　(1)ゲノムを適当な制限酵素で切りサザンを行う。
　(2)その結果からサザンででたバンドを切り出す。
　(3)プラスミドにライゲーションする。
　ここからオリジナルですが
　(4)形質転換せずに（コロハイせずに）カラムで精製して部分配列のプライマー　　（それぞれの方向に伸びるプライマーを２種用意）とベクター上のプライマーで　　ＰＣＲをかける。
　(5)得られたバンドをＴＡクローニングする。
　(6)全長が得られるまで(1)から(5)を繰り返し行なう

回答No.1

yutaka007

アダプター（リンカー）ライゲーション後のＰＣＲに似てますね。方法がイマイチ分からない（私の解釈したやり方と意図されているものが違うかもしれません）のと目的が良く分からない（遺伝子取ってから何に使うのか？シークエンス情報のみ必要？発現させたり、プロモーター解析したりするのか？）ので判断が難しいですが、私は良い考えとは思いません。

先輩や指導教官に聞けば分かると思いますが、皆がやっているやり方にはそれなりの理由がありますよ。(・o・)