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フォスファターゼ特定の実験方法を教えてください。
大学3年の学生です。先生に調べて来いといわれたのですが。 ある生物の硫安塩析液中の粗酵素(プロテアーゼインヒビター作用してあります)のphosphatase活性があることがわかりました。 そのphosphataseの特定をしたいです。また、どこでどのように作用しているのか調べたいです。 どのような研究方法があるのでしょうか?
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カラム精製→(SDS-PAGE)→MS/MS→degenerate primerで遺伝子のクローニング Silencer® Phosphatase siRNA Library Subset (ambion)のその生物版を作ってどれで活性がなくなるかを調べる cDNAライブラリー作成→同じ活性のあるクローンの単離 変異原処理をしてその活性を失った株の原因遺伝子を同定する >どこで 抗体でin situ GFP融合たんぱく質を発現させる >どのように作用しているのか ノックダウン(ノックアウト)で表現型を見る
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- c80s3xxx
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回答No.1
まずはともあれカラムにかける
質問者
お礼
カラムにかけてみます。 ありがとうございました。
お礼
僕は、実験自体あまりしたことがないので、わからないことやわからない単語がいっぱいです。皆様が、当たり前だと思っていても、知らないことがあると思います。 MIYD様に教えていただいたこれらのことを、調べつつがんばりたいと思います。 回答ありがとうございました。