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硫安沈殿でのタンパク濃縮
硫安(80%)沈殿を用いて 微生物由来の加水分解酵素を濃縮しました。 1Lを20mLにしたにも関わらず 活性は2倍、タンパク濃度3倍でした。 硫安が原因で失活した例は聞いたことがありません。 遠心後、沈殿せずに漂っていた析出物がありました。 この沈殿せずに漂っている析出物が酵素なのか、 そもそも硫安で析出しなかったのか・・・。 硫安で沈殿させられない酵素は有得るのでしょうか?
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80%硫安でも沈殿しないタンパク質はあります。 一度、上清に残っていないか確かめてみてはいかがでしょうか。 硫安の濃度をもう少し上げるか、時間をかけて沈殿させるなどの方法で解決するかもしれません。 また、 >硫安が原因で失活した例は聞いたことがありません。 というのは、あなたの扱っている酵素についてでしょうか? 一般的には、硫安で失活することはあります。 塩濃度が高くなるとだめなものや、タンパク質濃度が高くなるとだめなものもかなり多いです。
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- aka_tombo
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回答No.1
はずしているかもしれませんが、培地が糖リッチである条件の時に、硫安塩析が非常にやりづらかったことがあります。 糖の濃度と相関があるかまで調べておりませんが・・・ 対象の菌はasp.oryzaeでした。酵素はプロテアーゼだったのでそんな特殊なものではないと思います。