QC-PCRについて

質問

QC-PCR（Quantitative Competitive－PCR）についてその原理が良くわかりません。
PCRプライマーを競合させるようなのですが、具体的にどのように働いて競合させ、
そしてどのように定量するのでしょうか？

どうか丁寧に教えてください。おねがいします。

回答No.2

pi-pi · ベストアンサー

ふつう、ＰＣＲというのは検出するDNA断片の一つに対して、
一対のプライマーを設計しますよね。
ところがこの場合には増幅がプラトー（増幅限界を超えて、それ以上増えない状態）になった場合に、
定量が正確にできなくなってしまいます。ですから普通は、キャリブレーションを
とって、最適な増幅回数を決定してから本実験（定量実験）を行うわけです。
この場合はプライマーの余剰が問題になるわけです。
（と、この辺の話はおわかりでしょうか？）

一方、競合的ＰＣＲの場合は、目的とするDNA断片に加えて、”それと異なる配列を
持つけれども、同じプライマーで増える別のDNA断片（ＲＴ－ＰＣＲの場合は
内部標準となるDNA断片を加えることが多い）”を加えます。
もちろん、この別に加えるDNA断片はあらかじめ量が分かってるものです。
そうすると、２種類のDNA断片が、１種類のプライマーを奪い合う訳ですから、
増幅がプラトーに達してしまう前にプライマーが枯渇してＰＣＲが終了します。
（この「奪い合う」状態が、「競合的」の語源になってます）
後から加えたDNA断片は、量が分かっているわけですから、それに対して
目的のDNA断片の増幅量を比較すれば、定量ができるという仕組みです。

競合的ＰＣＲは定量的ＰＣＲを行う方法のなかでも、
プライマーの余剰によるプラトー効果を防ぐ方法というわけです。

たぶん、これであってたはずです。家に帰ればちゃんとした資料が
置いてあるのですが…。現在会社なので（笑）
学生時代のつたない記憶を思い起こして回答してます。

＃１の方の話は、
バイオ実験イラストレイテッド３＋：細胞工学別冊
「新版　本当に増えるＰＣＲ」第８章
中山広樹著、（株）秀潤社発行　のことですよ。
競合的ＰＣＲの話は図がないとひじょーに説明しにくいので（笑）
いちど本屋さんをのぞいてみることをおすすめします。
ただし、医学部がある大学内の本屋か、紀伊国屋や旭屋、進々堂など、
専門書を扱っているかなり大きな書店でないと、置いてないですよ！

回答No.1

okapon

「細胞工学別冊　バイオ実験イラストレイテッドの３＋」中山…とか分かり易く書いてなかったっけ???うる覚えなのでこれぐらいで勘弁してください。