Competitive （RT-） PCRについて

質問

Competitive（RT-）PCRの原理は何とか理解したのですが、実際に定量実験をするときに、Competitorに具体的に何を使用して良いか分かりません。Competitorは市販されていて購入できるものなのでしょうか？
それとも自分で検討して、DNAなどを精製又は合成して加えるものなのでしょうか？
合成オリゴなどを使用するのでしたら　Competitorの選択基準など教えてください。またPrimerなどもTargetに特異的なもの以外で使用するのでしたら是非教えてください。
今現在、細胞由来のｍＲＮＡの定量をしたいと考えているのですがノーザン法では余りうまくいきません。是非よろしくお願いします　_(,~,)_

回答No.2

o-coo · ベストアンサー

昔少し行っていたので（昔なので間違って言っていたり、方法が変わっていたらごめんなさい）書きますが、ＲＴ-ＰＣＲってreverse transcription- polymerase chain reactionですよね。
　ほんでもって、Competitive（RT-）PCRは、対処となる標準ｍＲＮＡを入れて
Competitiveに増殖させて、本当に目的のもが、頭打ちになった状態の増殖にならない様に行うと思ったのですが。違います？？
　以下のＨＰでは合成したものを使用しています。自分のときは少し記憶があいまいでしたけど、増える事が分かって、濃度が測定されているＲＮＡとプライマーを入れた記憶があります。同じ系でＰＣＲ行って、増えているかを見たと思います。
　ＲＴ－ＰＣＲも色々な方法がありますので、そちらも試されてはいかがですか？

参考URL：

http://sockeye.sci.hokudai.ac.jp/Teaching/rtpcr.html

回答No.1

noname#17364

こんにちは。
ご質問とはちょっと主旨が違うかもしれませんが、mRNAの定量を行うのであれば、現在の世間の主流はReal Time-PCRという方法だと思います。俗にTaqmanシステムなどと呼ばれています。
QC-PCRに比べ感度が高く、実際の手技も簡単だと思いますが、それ用の機械（ABIだと思います）を購入しなくてはいけなくて、コストが問題かもしれません。