エレポ後のコンタミについて

質問

エレクトロポレーション法によって粘菌細胞内にプラスミドを挿入後、シャーレで培養をしており、3日に1回のペースで培地交換をしています。選択薬剤はG418を使用しています。

操作はクリーンベンチ内で行っており、器具へのUV照射やバーナーの火による滅菌、自分の手などの消毒などにはかなり注意しているつもりではあるのですが、コンタミが頻繁に起こります。
同様の実験を行っている同期は、ほとんどコンタミしていないので共同使用の培地などの汚染は考えにくいです。

この場合、やはり自分自身の実験スキルや消毒などに問題があるのでしょうか？

シャーレの培地に白い小さなカビのようなものが浮遊していたので、コンタミだと考え、先輩にもカビだと言われたのですが、過剰培養による細胞の浮遊化なんてことはないですよね？
(知識が皆無に近いので、上記のことがあり得ない考えでしたら、申し訳ありません。)

先輩などに聞いても、コンタミは気をつけることでしか防げないと言われたのですが、細心の注意をはらってもコンタミしたので、非常に困っています。

問題点や注意点、助言などがありましたら、是非ご教授お願いいたします。

回答No.1

stringf35 · ベストアンサー

まさに「コンタミは気をつけることでしか防げない」ですが、コンタミしやすい人とまったくしない人が共存できるのも事実です。

＞シャーレの培地に白い小さなカビのようなものが浮遊していた

カビのコンタミは増殖が遅いので原因の特定が難しいことが多いです。まずは新品に交換できるものをすべて交換すること（共同培地もやめて自分専用にしましょう）、使い捨てに置き換えられるものは滅菌済みの使い捨てのものにかえること、UV照射やバーナーを過信せず無菌操作を徹底すること、です。クリーンベンチの前でくしゃみしたり、作業中に頭かいたり絶対にしないこと。クリーンベンチは前ガラスを開放しすぎると無菌環境が保てません。今の時期はエアコンからのコンタミもあり得るので、開けすぎないようにしてください。

細胞は死んだら浮いてくるので、過剰培養による細胞の浮遊もありえます。もしかしたらおおもとの細胞がコンタミしていることもあるかもしれないです。同じエレポ使っている人は他にいますか？いるならその人に見てもらう（可能なら同時にやってもらう）のがベストだと思います。エレポの機械からコンタミしているかもしれないので。

コンタミが続くと辛いですが、めげずに頑張ってください。

お礼

ご回答ありがとうございます。

自分自身で気を付けているつもりでも、無意識のうちの行動がコンタミにつなっがているのかもしれませんね…。自身の行動一つ一つに気を配るほか、先輩に見てもらおうと思います。

過剰培養による細胞浮遊の可能性もありえるのですね！
もしそうだとしても、培地交換のペースが遅いということで、やはり自分の責任ですね…。
知識不足なもので、カビと浮遊細胞の見分けもできないのですが、何か見分けるポイントなどはありますでしょうか？