TAクローニングが上手くいきません。何故？

質問

ＴＡクローニングの際、エレクトロポレーションによる1度目の失敗以降コンピを作り直し、気泡に注意しながら再度エレクトロポレーションを施してSOC培地中で培養し、LB＋amp培地上に塗布しました。37℃の下で16時間培養しました。

しかし翌日。
全くコロニーが確認出来ませんでした。
何故なんでしょうか？

ＴＡクローニングを始めて日が浅く、知識もまだまだ不十分なので、助言をいただければ幸いです。よろしくお願いします。

回答No.1

MIYD

>何故なんでしょうか？
貴方がどこかの操作で失敗したからでしょう。

貴方の行った操作のうち、間違いなく出来ていると他人に説明することが出来る部分はありますか？

エレクトロポレーションをするときに、コントロールのベクターも行っていますか？
行っていれば、コントロールでコロニーが生えるかどうかで、エレクトロポレーションの操作が適当であるかどうかを示すことが出来ます。

ライゲーション反応の際に、コントロールのインサートを入れたサンプルは作りましたか？
それが成功していれば、ライゲーション反応には問題が無いことになります。
その前の挿入する配列の調整部分に問題があることになります。