ライゲーション

質問

実験でプラスミドｐUC19（約2700bp）をEcoRIで切断して、インサートDNA（約48000bpのλファージDNAをEcoRIで切断したもの）にライゲーションしたのですが、この結果どのようなDNA分子が形成されるのでしょうか？複数あるようです。
この質問内容では情報が不足していると思いますので、簡単な図みたいなもので形だけでもわかればいいのでお願いします。

回答No.2

geneticist12 · ベストアンサー

lambda DNAは線形のDNAで内部に5箇所のEcoRI部位を持つので、6つの断片に分かれます。
http://www.nippongene.com/pages/products/clomod/dna_vec/lambda/lambda_1.png

各断片の長さは、laambda EcoRIマーカー（電気泳動のときのサイズマーカーとして使われる）の製品情報を見てください。
http://www.cosmobio.co.jp/product/products_FER_20060327/products_FER_20060427_others.asp

これらの断片のうち、両端に位置する、もっとも長い断片と最も短い断片は、片側にしかEcoRI末端がありませんから、クローニングされないでしょう。
それら2つを除いた4断片がそれぞれ一つずつクローニングされたものと、インサートが入らなかった空のプラスミドが、もっとも予想される産物です。

そのほかにも、複数の断片同士がEcoRIで結合したインサートが入っている可能性もあります。

ただし、インサートが長いほど、取れてくる頻度が下がりますから、多く取れるもの、まれにしか取れないものがでてくるでしょう。

お礼

かなり参考になりました。ありがとうございます。

回答No.1

MIYD

足りない情報は、
まずはこの質問が課題の丸投げではないということを示す情報ではないでしょうか
後は、制限酵素処理とライゲーション反応で何をしているのかをどこまで理解しているのかという情報でしょうか

簡単な図だと、
○とーが出来ます

○の方は、
セルフライゲーション
インサート1入り
インサート2入り
インサート3入り
インサート4入り
複数のインサートやベクター入り

ーの方は
ライゲーションされていない断片
されている断片

になります

お礼

返答ありがとうございました。
課題の丸投げに思われる内容でしたが、簡単な図を書くことはできたのですが、もっと詳しいことが知りたかったのです。どこまで十分なのか不明なので質問させてもらいました。