DNA断片の標識法

質問

DNA断片の標識法にはどのようなものがあるか、また、その方法についてどのようなものか知りたいのですが、知っている方いらっしゃいますでしょうか？関連サイトでもよろしいので教えてください。

回答No.2

geneticist12

標識の種類は先の回答者が述べているので、標識の手段をあげてみましょう。ポピュラーな方法に限ると、

酵素を使う方法（内部標識）
１．ランダムプライマー法。鋳型DNAに対し、ランダムな配列をもつ短いDNA (6-8bp) をプライマーにしてDNAポリメラーゼKlewno断片でDNA合成するときに標識ヌクレオチドを取り込ませる。

２．ニックトランスレーション法。二本鎖DNAにDNaseIでニック（切れ目）を入れ、PolymeraseIが切れ目から古い鎖を分解しつつ新しい鎖を合成するときに標識ヌクレオチドを取り込ませる）。

3. PCR法。PCRでDNA合成するときに標識ヌクレオチドを取り込ませる。

酵素を使う方法（末端標識）
1. DNA末端をポリヌクレオチドキナーゼと放射性リンをもつATPでリン酸化する。

2. ターミナルトランスフェラーゼがDNA末端から鋳型非依存的にヌクレオチドを重合するのを利用して標識ヌクレオチドを付加する。

3. 制限酵素消化した5'突出末端をKlenowやT4 DNA　polymeraseで平滑化するときに標識ヌクレオチドを取り込ませる。または、これらの酵素がexonuclease活性をあわせもつので、DNA末端を削り込ませたあと再び合成するときに標識ヌクレオチドを取り込ませる。

化学的に標識する方法
1. 末端標識をいれた形で、PCRプライマー、オリゴDNAプローブを合成する。

2. DNAと化学反応して結合する活性基をもったリンカーに標識をつけ、DNAと混ぜる。

お礼

とても参考になりました。ありがとうございました！

回答No.1

MIYD

どのようなものがあるかについては、

同位体（32P,3H,14C,13C,15N）
蛍光(Cy3,Cy5,Cy5.5,FITC,rhodamin,rhodamin-green,Texas red)
その他、ビオチン、DIG
などでしょうか。

プライマー合成　受託
などで検索すればいろいろな標識をしてくれるメーカーがありますが、
標識方法について書いてあるところが見つかりませんでした。

お礼

ありがとうございました！