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ゲノムDNAをテンプレートにしてシークエンス?

ABIのBigDye terminator v3.1のプロトコールをみていたら、テンプレートDNAの定量のところに「バクテリアゲノミック DNA」というのがありました。 それ以上のことは詳しく載っていなかったのですが、これは、「ゲノムをテンプレートにしてダイレクトにDNA配列を決定する」ということができるという意味なのでしょうか? ご存知の方がいらっしゃいましたら教えて下さい。 よろしくお願いいたします。

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  • MIYD
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回答No.1

BigDye terminator v3.1を使っていますが、 マニュアルが見当たらないし、登録していないのでPDFでも読めませんが、 Strep. pyogenes というバクテリアでダイレクトシーケンスをしている例が参考URLにありますね。 プライマーの設計やテンプレートの精製がめんどくさそうなので自分でやるのならば一度PCRで回収してから PCR産物をテンプレートにして読むと思いますが。

参考URL:
http://www.genome.ou.edu/big_dyes_bact.html
joyjoyjo
質問者

お礼

ご返答ありがとうございます。 ゲノムをテンプレートにして読めるものなんですね。 ゲノムが読まれていないバクテリアの特定の遺伝子を他の種で保存性が高い領域から混合primerを作成し、PCRで増幅してシークエンスを決めようと思っているのですが、開始と終止の部分をどうやって決めようか検討をしているところでした。 inverse PCRをしようかと考えていたところに、BigDyeのプロトコールが目にとまり、簡単にできるならと思って書き込みをしました。 教えていただいたHPをもう少し精読して、検討させていただきます。 本当にありがとうございました。

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