【ＰＣＲ】GAPDHでの確認方法がわかりません

質問

初歩的な質問なのは自覚しています。
どなたかわかりやすく教えてください。

大学の研究室に所属している学生なのですが、
先生から「サンプルをＰＣＲしておいて！ＧＡＰＤＨも一緒に」
というような連絡をもらいました。

一般的なＰＣＲの操作、電気泳動での確認はしたことがあるのですが
ＧＡＰＤＨを扱ったことがなく、困っています。
先生が不在ですぐに質問できる状況ではないため、自分で調べてみて
インターナルコントロールがどういうものかはわかったのですが、具体的な操作がわかりませんでした。

ＧＡＰＤＨ用のプライマーを一緒に入れればよいのでしょうか？

回答No.2

browntraut · ベストアンサー

GAPDHは一般にハウスキーピング遺伝子です。

よって、「GAPDHが出ているのに、目的の遺伝子のバンドがない」といったときは
細胞がちゃんとおり、PCRもワークしているが、目的の遺伝子がなかったということになります。

GAPDHすら出ていないのであれば、PCRは失敗とされることでしょう。

GAPDH用のプライマーがあるのでそれを使いましょう。

また、目的の遺伝子を増やすPCRとは別に反応させましょう。

お礼

回答ありがとうございます。
大変わかりやすかったです。

いつも通りPCRを行い、また別にプライマーをGAPDH用に変えて同様に行ってみればよいということですかね。
頑張ります。

回答No.1

noname#250373

PCRの反応溶液の組成(MgCl2など)や、反応条件(PCRのプログラム)が同じで、
なおかつ、PCRのプロダクトサイズが異なり電気泳動で区別できる、
ということでしたら一緒に反応できるのですが、
そうでなければ個別にPCRする必要があります。

以上のことが不明であれば、基本的に先生に問い合わせる内容かと。

お礼

回答ありがとうございます。
先生にも確認し、やってみようと思います。