蛍光染色の方法について

質問

マウスの脳下垂体前葉のGH細胞とPRL細胞を染色して大きさを観察したいのですが、染色方法がわかりません。
それについて知っている方、またはそのような論文をご存知の方がいましたら教えて下さい。
お願いします。

回答No.2

dora1

質問者の方の経験の程度がわからないので、適当に答えてみますので、必要でしたら補足してくださいね。

Somatotropeとlactotropeを区別して染め分けるには、抗GH、抗Prl抗体を用いた免疫組織化学か、mRNAをターゲットにしたin situ hybridizationなどを行うことになるでしょう。いずれの方法でも、抗体や核酸プローブを、最終的に蛍光標識して可視化することが可能です。方法の簡便さなどの点で、前者の免疫組織化学がよいと思われます。適当な抗体を入手してください。染色方法は、「ふつうの免疫組織化学」で全く問題ないです。手許にある免疫組織化学の蛍光標識の方法の書いてある本の方法でそのまま実験をしてみてください。ホルモンを貯留している細胞ですから抗原は細胞内に豊富にあり感度の問題はないでしょうし、抗原性も問題ないので大抵の抗体なら組織をホルムアルデヒド固定しても問題なく染まります。パラフィン切片が使いたいなら、抗体を買うときにパラフィン切片OKの抗体を選べばよし。

もし参考文献が必要なら、PubMedに行って、pituitary growth hormone prolactin immunohistochemistry quantitativeなどで検索してみることをお勧めします。注意点は、必ず複数の論文にあたり、方法を比べてみること。染め方が違うと、その後細胞の大きさを測るときのやりやすさが大きく変わる可能性がありますので。

お礼

ご返答いただきありがとうございました。

文献を調べた結果やはり抗体を使った蛍光染色が一番良さそうなのでその方法をとってみることにしました。
現在抗体を探していて、群馬大学の生体調節研究所というところで使えそうな抗体を見つけました。

よい結果が出るよう、頑張って実験します。

回答No.1

noname#4684

大きさを比較するだけでよいのでしょうか？

もしそうなら，GH細胞とPRL細胞をトリプシン処理などでシングルセルの状態にし，サイトスピンでスライドグラスに貼り付けてください．これをHE染色やギムザ染色液などで適当に色をつければ，顕微鏡でみて大きさの比較はできると思いますよ．

補足

ご返答いただきありがとうございます。

文献を調べた結果、細胞の分画方法はわかったのですが、スライドグラスへの付着方法がわかりません。回答の方に『サイトスピンを使った方法』がかいてありましたが、もしよろしければその方法を詳しく教えてください。お願いします。