キモトリプシン分子量バンド

質問

ＳＤＳのバンドが分からなくて困っています
Ａ鎖は1.4kDa付近で小さくて見えないのですが、B鎖14kDa付近、C鎖が10kDa付近のものとすると、Ｂ鎖がダブルバンドやトリプルバンドになって出てくる場合があります。
卒論前で困ってます@_@;;
よろしくお願いします☆

回答No.2

owata-www

一番考えられるのはキモトリプシンによる自己消化ではないでしょうか？

トリプシンやキモトリプシンをSDSで確認したことはないですが、よくトリプシンは使っていると自己消化を起こして活性が落ちていきます。

お礼

回答ありがとうございます

回答No.1

owata-www

まず、確認から…サンプルにSDSと2-MEorDTT（還元剤）は加えてますか？

補足

加えています
すみません説明が足りず画像を載せましたが一番右がマーカー上から31, 21.5, 14, 6.5 kDaです。
この実験はキモトリプシノーゲンを、キモトリプシノーゲン:トリプシン＝15:1のモル比で混合し、37℃で50分間消化させ、PMSFでストップさせたものです。

25 kDa付近はキモトリプシノーゲン
そのすぐ下はそれを消化させたトリプシン(23.5 kDa)
21.5 kDaのマーカーと同じ高さのものは活性加速度的におかしいと思いますがπ-キモトリプシンかなと思います
一番下はキモトリプシンＣ鎖だと思います
キモトリプシンＢ鎖と思われるところに3本出ているものが、なんだかわからないのです
この実験を何度もやっているのですが、これが1本だったり2本だったり、条件の違いで(それもどんな条件のときと確定できず)起こります。
トリプシン量は少ないので、バンドに出るか出ないくらいですから、トリプシンではないと思うのですが
すみませんどうも