his タグ

質問

クローニングにおけるhis　タグの発現のさせ方がわかりません。
ｃDNAを作成する際に目的タンパク質とヒスチジンをコードするmRNAを使うのですか？
さっぱりわかりません。
また、PCR法を用いた時でもhis　タグは付けれるのですか？
へたくそな文章ですいません。

回答No.2

otx

http://www.cosmobio.co.jp/support/technical/tech_NVG_20040518/tech_NVG-1-D_20040518.asp

http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.asp?unitid=U100004644

このようなものを用いてもHisタグが付いたタンパク質を作ることができます。

回答No.1

dolphino

まずクローニング用ベクターと発現用ベクター、そしてサブクローニングについて調べるとよく分かると思います。

目的遺伝子のPCR増幅の時にHis-tagをつけるのは不可能とは言いませんが普通やりませんね。

PCRのためのプライマーはどうやって作るかご存知でしょうか？自動合成機を使いますが化学合成です。今では発現用プラスミド全部合成して売ってくれる会社もあるぐらいです(高いですけどね)。

お礼

ありがとうございます。これからしっかり勉強します。