締切済み リアルタイムPCR に用いるプライマーに関しての質問です。 2008/02/26 22:10 BALB/cとC57BL/6 の異なるマウス間で同じプライマーを用いてPCRして大丈夫でしょうか？ みんなの回答 （2） 専門家の回答 みんなの回答 otx ベストアンサー率44% (256/576) 2008/02/27 10:15 回答No.2 遺伝子は何でしょう？ 質問者 補足 2008/02/27 14:44 皮内のmRNAを測定する予定です。 通報する ありがとう 0 広告を見て他の回答を表示する（1） MIYD ベストアンサー率44% (405/905) 2008/02/27 07:49 回答No.1 全ゲノム配列が100%同じではないということは知っていますよね？ 大体は増えると思いますが、 運が悪ければ、だめです。 質問者 お礼 2008/02/27 14:43 わかりました。ありがとうございます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A RT-PCRとリアルタイムPCRのプライマーの違い 初歩的な質問ですがご助言願います。 リアルタイムPCR用に設計したプライマーを用いて RT-PCRをかけようと思うのですが そもそも、この２つのPCRのプライマーに設計上の違いはあるのでしょうか？ 違いがあれば、RTではうまくいかないのでは？と思っています。 ちなみにこのプライマーでできるターゲット産物のサイズは400bp程度です。 ロングプライマーでのPCR 通常のPCRは20mer程度のプライマーで行います。しかし、現在実験の過程で70merのプライマーを使ってPCRをしようと考えています。これほど長いプライマーでPCRは可能でしょうか。また、可能ならPCRを行う段階での注意点を教えていただけないでしょうか。ちなみに、TM値を計算したところforward、reverse共にTM値が71でした。 リアルタイムPCRのプライマー設計について リアルタイムPCR のプライマー設計の、注意点として、[3'末端側にはGC 及びAT リッチなプライマーは避ける]と、よく専門書に書いてあるのですが、具体的に、 3'末端から何塩基までの間にGC 及びAT リッチな領域があるとダメなのでしょうか。 また、リッチとは具体的にGC 及びAT がどのくらい含まれていることを指すのでしょうか？ 解答よろしくお願い致します。 日本史の転換点？：赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム PCRにおけるプライマーの作り方 ＰＣＲ反応において、例えば、5'末端からcactgtccttctgccatggcとgcaactagacgcagcccgcaとｍＲＮＡが並んでいて、これら二カ所をプライマーとして用いた場合二つのプライマーの塩基配列はどうなるのでしょう？？それぞれに相補的な塩基配列になるのでしょうか？？ リアルタイムPCR用プライマーの設計 Roche社のライトサイクラーを用いてリアルタイムPCRを行う予定なのですが、増幅サイズをどのくらいに設定してプライマーを組めばよいのでしょうか？ タカラバイオ社のマニュアルでは80～150bpと書いてありますが、400bpくらいで行っている人もいます。 機種によって異なるのでしょうか？ PCRとはどんな試験法なのでしょうか？また，「プライマー」とは何でしょ PCRとはどんな試験法なのでしょうか？また，「プライマー」とは何でしょうか？このプライマーが変わることで何が違うのでしょうか？また，このプライマーを選定するのは，どいう理由になるのでしょうか？初心者なので，参考となるサイトまたは解説をよろしくお願いします。 RT-PCRのプライマー RT-PCRの逆転写反応の際に使うプライマーについての 質問です。プライマーは、Oligo dT primerか、ランダムヘキサマー プライマーのどちらを使っていますか？ また、どこの会社からプライマーを購入しているか教えて 頂けたら助かります。 PCRプライマーの保存について PCRプライマー（非修飾）をセットで保存することは問題ないでしょうか （つまりフォワードとリバースを一緒にということです。）？ PCR反応の最初のステップで95℃で5分のステップを行っていれば、 プライマダイマーを作ってしまったとしても問題はないと思うのですが PCR プライマー等の入れ方 ＰＣＲを行う時に、Ｍｇやプライマー、buffer等を少量ずつ入れますが、それぞれ入れる度にピペッティングしていますか？？ それとも壁面につけて遠心して落としていますか？ どちらでも良いとは思いますが、どちらがベターかと疑問に思いました。 みなさんはどちらでやっていますか？？ PCRのプライマーの濃度について PCRについての知識はあまり無く、はじめて、PCRをします。 RAPD法を行ないたいと思い、長さ10merのオリゴマーというものを購入し、これをプライマーとしました。 しかし、内容量 0.5OD、Tm値 32℃としか説明書には 書いてないのですが、 プライマー濃度を1μＭにするには どうしたらよいのでしょうか？？どのように 計算してよいのか わからず大変困ってます。どうか、宜しくお願いします。 ＰＣＲのプライマーについて こんにちは。少し前から微生物について学び始めた学生です。 このたび基礎実験で、ＰＣＲを行うことになりました。そこで大腸菌だけを特異的に検出するためのプライマーを探しています。 自分で文献などを調査してみましたが、いいものが見つかりません。 どなたか大腸菌だけを特異的に検出できるプライマーについての情報をお持ちの方がいらっしゃいましたら、教えてくださいませんか？よろしくお願い致します！ 参考になるサイトや文献など、もしご存知でしたら重ねて教えていただけると幸いです。 RT-PCRにおけるプライマー設計について はじめてお世話になります。 通常のPCR時におけるプライマー設計は理解できるのですが、RT-PCRにおいては、はじまりが1本鎖のcDNAであるということでひっかかりを感じます。 cDNAの塩基配列がわかっていますのでそれをもとに遺伝子解析系のソフトを用いてプライマーを設計したところ、sense-primerの配列が、ｃDNAの相補鎖となるものと相補的になっていました。（anti senseのほうはcDNAと相補的だったのですが） 実験書を読むとsenseがまずcDNAとアニールして2本鎖になってから通常のPCRがはじまるというふうに理解できましたので、上記のプライマー設計ではPCRがおこらないということでしょうか？ この場合はｃDNAの相補鎖に対してプライマー設計をおこなえばよいのでしょうか。 それともこのままのプライマーでよろしいのでしょうか？ よろしくお願いいたします。 PCRのプライマーって ある遺伝子をゲノムからクローニングしてきてタンパク発現を行おうとしています。 しかし、PCRの段階でｃDNAが増えません。 増えない理由として、プライマーの設計が間違っているからと指摘を受けました。遺伝子操作にはだいぶブランクがあるので、あまり自信がないのですが、 例えばgenebank などで検索したある遺伝子の配列が AGTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGTAG だとすると、 AGT側が５’TAG側が３’だという事で ５’側プライマー AGTGGGGG…→ ３’側プライマー CTACCCCC…→ と設計しました。 しかし、シーケンスの5'と3’を逆に捕らえていると指摘されたのですが…。 私の理解は間違ってたんでしょうか。 そんなことないと思うんですが・・。 ちょっと自信がなくなったので聞きに来ました。 よろしくお願いします。 プライマーなしでのOverlap Extension PCRについて 異なる遺伝子（PCR産物）を鋳型にしたPCRで、プライマーを付けずに伸長反応をさせることにより、異なる遺伝子をつなぎ合わせて、その後プライマーを入れてのPCR反応により、異なる遺伝子をつなげて増幅できると論文にありましたが、プラマーがないと異なる遺伝子が反応せずに残るのではないかという意見もありました。 このようなOverlap Extension PCR場合、サイクル数、プライマーの有無はどのようにすればよいのでしょか？ PCRにおけるプライマー合成について プライマー合成の記述で まず、増幅したい遺伝子部分の５’末端にあたるセンス鎖およびアンチセンス鎖それぞれのオリゴDNAプライマーを設計、合成する。 という記述は正しいでしょうか？本にこれがあったのですが5'末端でいいのかよわかりません。 PCR素人なのでよろしくお願いします。 プライマー NESTEDまで行うPCRのプライマーを設計したのですが、実際行ってみると、NESTEDまでPCRを行ったものはくっきりとバンドが出でいたのですが、ファーストPCRを行っただけのPCR産物の方にはバンドがほんとにごくわずかしかでていません やり直した３回とも同じ結果です 以前ほかのものを行った時も、ほとんどバンドが出ないプライマーのセットがありました きちんと作成して、存在するはずの塩基配列のプライマーなのに、このようにPCRで増幅しにくいものがあるのはどうしてでしょうか PCR 文献の中にミスマッチPCRという方法が書かれていました。 内容としては、まず１対のプライマーでPCRをした後、さらに別の１対のプライマーを用いてPCRをするというものでしたが、そのときのプライマーの１つがミスマッチプライマーを使うのです。 そしてその後制限酵素によりPCRーRFLP法で遺伝子多型を解析しているのですが、なぜミスマッチプライマーを使うのか分かりません。 よろしくお願いします。 プライマー（PCR・RT-PCR用）の保存 約一ヶ月前にプライマーを注文しました。発注から一週間ぐらいで届いたのですが、そんなに急いでいなかったので、届いた後は開封もせず、そのまま恒温室（22℃、湿度約60%：人の出入りがあった場合は多少前後すると思います。）に保存しておきました。近々そのプライマーを使ってPCRをやる予定でいるので本日（12/9/'04）封を開けてみたら、なんと「乾燥品」だと思っていたのが「溶液」でした！送られてきた時は常温出荷だったのですが、注意書きにも当然-20℃で保存と明記されています。果たしてこのプライマーはまだ使えるのでしょうか？どなたか教えてください。よろしくお願いします。m(_ _)m ジェノタイピングでのプライマー 野生型マウスとノックアウトマウスでジェノタイピングを行っています。基本的なことなんですが、使用するプライマーが３本だったり４本だったり、通常のRE-PCRのように２本ではない理由はなんでしょうか？ご教授お願いいたします。 リアルタイムPCRについての質問です。 PCRまったくの初心者です。 cDNAを作成してそこからRT-PCRを回して解析するという方法をとっています。 前任者の引き継ぎで、比較する検体を追加して解析する必要があるのですが、 前回前任者が用いていた陰性コントロール（A群）をPCRにかけてところ、Ct値が検出されませんでした。 プライマー・プローブなどはまったく同じでA群のCt値だけ出ず、最近採取した検体からはCt値が出ています。 以前（2年前）作成され、-20℃で保管されていた検体を用いたのですが、失活してしまったということなのでしょうか？ また、この場合当時の陰性コントロールの遺伝子発現量と今回採取した検体との間で遺伝子発現を比較することはできないのでしょうか？ 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば？ Part2 今も頑なにEメールだけを使ってる人の理由 日本が世界に誇れるものは富士山だけ？ 自分がゴミすぎる時の対処法 妻の浮気に対して アプローチしすぎ？ 大事な物を忘れてしまう 円満に退職したい。強行突破しかないでしょうか？ タイヤ交換 猛威を振るうインフルエンザ カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
補足
皮内のmRNAを測定する予定です。