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シークエンスについて
１キロベースの断片をシークエンスしているのですが、うまく行かないため、500ベースあたりでもう１本プライマーを作成しシークエンスを行うことになりました。（合計３本のプライマーを使用してます） ここで質問なんですが、最初断片を増やす為にＰＣＲを行いますよね？？ その時は３本使ってＰＣＲをおこなうのでしょうか？？？ そのご、シークエンス反応を行うのですが、その時は３本バラバラで反応をかけるのでしょうか？？ 今まではＰＣＲ産物にそれぞれＦ，Ｒと分けて反応をかけていました。 素人の質問ですみませんが、アドバイスの方よろしくお願いいたします。
- totoro0803
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- 化学
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プライマーをF1,F2,Rとすると、 F1,Rの組み合わせで増やして精製したのちに、F1,F2,Rをそれぞれ1つづつ入れて読むことが出来ます。 F2,Rの組み合わせで増やして精製したのちに、F2,Rのそれぞれ１つづつ入れて読むことが出来ます。 通常はシーケンス目的ではプライマーを同時に3種類入れたPCRは行いません。
お礼
ありがとうございます。 では、F1,Rの組み合わせで増やして精製したのちに、F1,F2,Rをそれぞれ1つづつ入れて読む方が一気に全てよめるって事ですよね？ さっそくやって見たいと思います。 ありがとうございました。