5'RACE～Tailing Reaction

質問

Promega社のTerminal Deoxynucleotidyl Transferaseを用いて以下の様にTailing Reactionを行ったのですがうまくいきません。
TdT 1μl
付属の5×Buffer 4μl
精製したcDNA溶液 14μl
2mM ATP 1μl total 20μl
以上の溶液を混合
37℃，60min　70℃，10minでインキュベート

現在、promega社の方にTdTの活性について質問をしているところで
その返答次第によってはTdT量を増やしたり、インキュベート時間を長くしたり
しようと考えているのですが何か良い方法・アドバイスがあれば教えていただきたいです。
よろしくお願いします。

回答No.1

kexe

Promega社さんのキット（でしょうか？）には
ポジコンとなりうるcDNAなどは含まれていないのでしょうか？
あるのでしたら試してみるのも手かと思います

私が５’RACEをしたときはサンプルと使うキットに
ほんと左右されました
がんばってください

お礼

やはり５’ＲＡＣＥって難しいみたいんなんですね・・・
ありがとうございます、がんばってみます！