制限酵素の最低必要量の求め方
今回、仕事でプラスミドDNAの制限酵素処理を行うことになりました。
私は分子生物学等の知識に乏しく(医療系出身ですので・・・)、いろいろな実験書や参考書を調べてみたのですがどうしてもわかりません。
うまく説明できませんので、あるページから例題をおかりしましたので、掲載させていただきます。
例題) 大腸菌 DNA を pBR322 の EcoRI 部位にクローニングする。次の問題に答えよ。但し,EcoRI 制限酵素1 unit は,λファージ DNA 1μg を,0.1M Tris・HCl,pH7.5,7mM MgCl2,50mM NaCl 中,37℃,1時間で完全に切断する活性として定義される。λファージ DNA は 50 kbp あり、EcoRI 部位は5カ所ある。
大腸菌 DNA を pBR322 の EcoRI 部位にクローニングするのに,10 μg の大腸菌 DNA を EcoRI 処理したい。必要最少量の 10 倍量の EcoRI を加えるとして,何 unitの EcoRI が必要か。反応は,37 ℃, 12 時間行うことにする。
計算方法等をわかりやすく教えていただけると幸いです。
基本的な質問で申し訳ないのですが、よろしくお願いいたします。
お礼
御回答ありがとうございます。 言い回しがわかりにくいだけで DNAが大腸菌の中で子ファージになったと理解すればよいのですね!