DNAのハイブリダイゼーション条件について
63bpのdsDNAをssDNAとして精製しました。
PerfectMatchとNCの2種類の63merのオリゴDNAに対して、ハイブリダイゼーションを行い、dsDNAの形成するorしないを確認したいと思っています。
確認の前段階として、2つのDNAをハイブリさせなければなりません。
ハイブリダイゼーションの温度はTmよりも5~20度低い温度で行うと聞きましたが、
ハイブリダイゼーションのバッファーはどうしたらいいのでしょうか?
50%Formamide,10mMリン酸バッファーpH7.0や100mM KCl,100mM Tris-HClpH7.4,2mM MgCl2などの例がありましたが、
FormamideやMaCl2を入れる理由がわかりません。
2つの質問になりますが、ご存知の方教えていただけると幸いです。
お礼
お礼の返事が送れてしまい申し訳ありません。 大変参考になりました。ありがとうございます!!なんかアイソトープも奥が深いですね!!