live/dead 染色剤使ったことある方いらっしゃいますか？L131

質問

live/dead 染色剤使ったことある方いらっしゃいますか？L13152です。

１ｍLあたりの細菌数計測するために使用したいのですが、英語がろくにできないため、マニュアル訳してもさっぱりわかりません。

日本語のプロトコル持ってる方、もしくは大まかな手順を知っている方、宜しければ教えていただけませんか？

自分の解釈では、A剤とB剤を何MLかの滅菌水にとかして、サンプルと混合させ１５分放置。その後、何かに濾過する。といった感じです。

回答No.1

grumpy_the_dwarf · ベストアンサー

生物学の方で質問を見て、週明けに正規のプロトコール拾ってから
回答しようと思ってたら削除されてたので、こちらで。

> A剤とB剤を何MLかの滅菌水にとかして

5mlと書いてあります。蒸留水は滅菌フィルターを通しましょう。

> その後、何かに濾過する

そこは観察方法次第ですね。菌数を揃えたスタンダードを設定して
蛍光マイクロプレートリーダーで一網打尽ってのもいいですし、血
球計算盤を用意して顕微鏡で地道に数えるのもいいですね。マニュ
アルでは、5μlとって18mmのカバーグラスをかけて蛍光顕微鏡でな
んて例も出てますが、全部数えるんでしょうかね。あ、もしかして
蛍光顕微鏡の励起フィルターの話が「濾過する」って訳になったの
かな。

お礼

ありがとうございます！
早速、明日研究室で頑張ってみます。