PCR法での失敗

質問

2回行った電気泳動でバンドが出ていたのに
　3回目は、薄くて全然あらわれませんでした。

　考えられる原因として
　(1)taqポリメラーゼを一晩４℃で保存してしまっていた
　(2)記憶にないが、バッファを入れ忘れたかもしれない
　(3)３回目だけ別のPCR機器を使った。

　(2)のバッファですが、やはり相当重要ですか？
　また、ポリメラーゼは強い酵素だと思いますが
　この条件で置いてしまっていたのは失活してしまうのですか？

　初心者です、宜しくお願い致します

回答No.1

Kunishige · ベストアンサー

こんばんは。

Ｑ．バッファですが、やはり相当重要ですか？
Ａ．メッチャ重要です。

ついでに、質問文では指摘のしようがありません。
質問内容もこんなトコで他人に質問することでは無いですが、回答を求めるならプロトコールを示した方がイイですよ。

回答No.3

nativepage

DNAポリメラーゼはマグネシウムイオン要求性です。
バッファ中のマグネシウムイオンがなければ増幅されなくて当然ですよ。

回答No.2

tunertune

＞(2)のバッファですが、やはり相当重要ですか？
必要なければ入れないでしょう。間違って違う酵素のバッファーを入れてしまったという場合にうまくいくこともありますが、入れていない場合は無理でしょう。

（１）やったことがないので分かりませんが、それが原因ではないような気がします。

（３）たまに機械の不具合により失敗することがあります。蓋の温度が上がらずカラカラになっていたり。

で、「薄くて全然あらわれませんでした。」とは結局バンドはあったのですか？