DNAの精製

質問

はじめまして。実験に関しての質問があります。

今マウス血清中の抗dsDNA抗体量を測定するためELISAを行おうと思っているのですが、その準備段階のdsDNAの調製で困っています。プロトコル通りに調製を行っているのですが、回収率が非常に悪く十分量が得られない状況です。
用いているDNAはSIGMA社のDeoxyribonucleic acid from Calf thymusです。
プロトコルとしましては、ソニケーション→　熱変性　→　ヌクレアーゼ処理（ssDNAの除去）→　精製(PBSへ置換)　です。
精製方法は、フェノクロ×２回、クロロホルム×１回、エタ沈、エタリンです。
ヌクレアーゼ処理後に濃度測定を行ったところ、十分量のDNAが残っていると思われるため、精製方法に何か問題があるのでは、と考えています。

この方法に何か問題があるでしょうか？もしくは精製方法を透析などに変更した方がよろしいでしょうか？
よろしくお願いいたします。

回答No.1

MIYD

濃度測定とはどのような測定方法ですか？
モノマーとポリマーを区別出来ているのですか？
残っていると思っているだけでなく、確認しましょう
電気泳動一回ですむことです

精製工程に問題があるのであれば、
ヌクレアーゼ処理後にはスメアが見られて、
どこかのステップで失われているはずです

ソニケーションにより切断されたDNAの平均鎖長を調べるついでに出来る操作です

補足

＞MIYDさん

回答有り難うございます。
濃度測定はOD260nmで吸光度測定により行いました。

分子生物初心者のため基本的な質問で申し訳ないのですが、モノマーとポリマーはどのように区別するのでしょうか？また区別しなければいけないのですか？

また電気泳動は何パーセントのアガロースで行えばよろしいでしょうか？
ソニケーション後のDNAは10塩基前後になると書いてあったため、電気泳動だと流れてしまって確認できないかと思い、行いませんでした。