ＤＮＡに関する質問です

質問

細胞試料における特定の配列のDNAを検出するにはどのような方法を用いればいいのですか？
ご存知の方がいらっしゃったら教えてください。
よろしくお願いします。

回答No.2

aries_1 · ベストアンサー

サザンブロッティング法があります。

～前提知識～
プローブ:探したいDNAの一部と相補的な配列を持つDNAまたはRNAのこと。
これに、32P,14C,3Hなどの放射性同位体で標識しておきます。

ハイブリダイゼーション:相補的な一本鎖の核酸同士が水素結合によって形成した二本鎖の核酸を作ること

～サザンブロッティングの手順～
(1)DNAを制限酵素で切断する
(2)(1)で出来た様々な大きさのDNA断片をアガロースゲル中で電気泳動させる
(3)DNA断片を含んだゲルを強アルカリ性溶液に浸して一本鎖にする(変性させる)
(4)変性したDNAをゲルからニトロセルロース濾紙に移動させる
これをブロッティングといいます(下の補足)
(5)ニトロセルロース濾紙とプローブを容器に入れてハイブリダイゼーションさせる
(6)ニトロセルロース濾紙を取り出し、洗浄してハイブリダイゼーションしなかったプローブを除去する
(7)それをX線フィルムに感光させる。バンドが観察できたら、そこに目的のDNAが存在しているのが確認できます。

補足
緩衝液を入れた容器の中に台を乗せ、濾紙を緩衝液に浸かるように台の上に乗せ、その上にゲルを乗せます。
また、そのゲルの上にニトロセルロース濾紙、ペーパータオルの順に乗せます。
すると、毛細管現象によって緩衝液が濾紙→ゲル→ニトロセルロース濾紙→ペーパータオルの順に上に上がっていきます。
このとき、ゲルの中にあるDNA断片も緩衝液の流れに乗ってニトロセルロース濾紙へと移動します。
これをブロッティングといいます。

お礼

サザンハイブリダイゼーションについて大変詳しく教えていただきありがとうざいました
ＤＮＡって色々深いんですね
大変参考になります。

回答No.3

negigi

単純に検出するだけなら、PCRのほうが一般的だと思いますが

お礼

ＰＣＲという方法でも検出できるんですか！！！
大変参考になりました
ありがとうございました

回答No.1

gohtraw

サザンハイブリダイゼーションでしょうか。検索してみてください。

お礼

サザンハイブリダイゼーションですね
検索してみます
ありがとうございました