間接蛍光抗体法について

質問

初めて間接蛍光抗体法を行います。

一次抗体に、抗人モノクローナル抗体（免疫動物マウス）は50mg/200μLを購入しました。

二次抗体は、次の二つがあります。

抗マウスIgG(全分子)抗体, F(ab′)2フラグメント-FITC標識 ヤギ宿主抗体。
抗マウスIgG抗体(全分子)抗体–FITC標識 ヤギ宿主抗体。

１．製品の違いをお教ください。
２．一次抗体の液量からして、二次抗体はどの程度の量を購入すれば十分でしょうか。

ご教示よろしくお願いいたします。

回答No.1

Mr_Spock · ベストアンサー

F(ab')2フラグメントは、全IgGを酵素でFcを切り離し、精製して取り除いたものです。
Fc領域を取り除いているので、
・ほ乳類の貪食細胞などに存在するFcレセプターに、（抗原抗体反応でない様式で）結合をする可能性がない。
・分子量が小さくなるので、浸透性がよくなる。
ということで、免疫組織化学（とくにほ乳類）に向いています。

>２．一次抗体の液量からして、二次抗体はどの程度の量を購入すれば十分でしょうか。
説明書きに目的別に、何倍希釈で使えという推奨希釈率が出ていると思います。

>一次抗体に、抗人モノクローナル抗体（免疫動物マウス）は50mg/200μLを購入しました。
それは何回分にあたるのか、一回に二次抗体希釈液がどれくらいの体積必要か、で決まってくるんじゃないですか。それと、抗体自体は長期間安定ですが、標識（とくに酵素標識）は失活しやすいので、長期間かかっても使い切れない量を購入するのは避けます。

お礼

回答ありがとうございました。
F(ab')2フラグメント　が、哺乳類に向いていることがわかりました。私は魚介類なので通常の二次抗体を使用することにします。

酵素標識が失活しやすいのには驚きました。大変ありがたい情報です。二次抗体にビオチンがついたものを使い、それにストレプトアビジンーペルオキシダーゼで酵素法も考えていましたので、大変参考になりました。