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PCRについてお教えください

既知の細菌検査として、ルーチンで PCR をやっている部署に配属されました。したがって、作業はできても原理についてはほとんど無知です。ある細菌の PCR 分析が必要になったため、方法を探索していたところ、AEMで見つけました。Target gene が 23SrRNA,16SrRNA で Primer Sequences が紹介されており、 Sequences は当然 A,G,C,T で構成されたいます。続いて、反応液の組成、そしてThermal cyclerの paramaters は明らかにDNA の複製そのものです。あれっ、Target gene が RNA なら、Template を一度逆転写せにゃーいかんのやなかな?逆転写については何も書かれていません。これはどういうことなのでしょうか?逆転写の「必要はないのでしょうか。お教えください。

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
  • prumin
  • ベストアンサー率71% (66/92)
回答No.2

普通は 16S や 23S を増幅する場合,当該リボソーマルRNAの遺伝子をコードしているDNA配列を読みますので,逆転写は不要です。

OKWave2008
質問者

お礼

ありがとうございました。簡潔でわかりやすく助かりました。

その他の回答 (1)

  • Dr_Hyper
  • ベストアンサー率41% (2483/6032)
回答No.1

AEMというのはApplied and Environmental MicrobiologyというJournalのことですかね?私は拝見したことがないので詳しくはわかりませんが、普通のjornalであれば逆転写のステップを省略して記載している可能性が大いにあります。または、使われている反応液に逆転写酵素などが含まれておりone tubeでRT反応ーPCRでの増幅が出来るキットもうられています。 またあなたが増幅したいのは発現している23SrRNA,16SrRNAであって、遺伝子ではないのですよね?ゲノムであれば逆転写の必要はありません。いくらrRNAといってもゲノムにコードされている遺伝子ですから。

OKWave2008
質問者

お礼

ありがとうございました。Applied and Environmental Microbiology です。RT反応については書かれていなくて(簡単な記述、引用とも)、Primer Sequences やPCR条件は詳しく書かれていました。私が増幅したいのは、Primer Sequences に書かれているDNAです。rRNAをコードする遺伝しを検出すると理解して、Templateの粗DNAにその遺伝子があるかを探索します。

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