ウエスタン・ブロット

質問

ウエスタン・ブロットで得られたバンドが
(1)大きく（時にはバンドより大きいです）滲んでいたり
(2)縦にスジが入ったり、します。
(3)また、バンド以外の部分にシミの様な黒点が現れる時がしばしばあります。

初心者なので、その原因が判りません。何が原因でしょうか？
また対策がありましたらお教えいただけないでしょうか？

どうぞよろしくお願いします。

回答No.4

p0ntakun

(1)大きく（時にはバンドより大きいです）滲んでいたり
　・電気泳動するときの蛋白量が多すぎたのかも。
　・メンブレン染色後、乾燥させるときにズレたのかも。
　　乾燥はちゃんと転写面を上に向けてる？
　・転写中にメンブレンがズレないようにしてる？
　・すすぎが不十分？

(2)縦にスジが入ったり、します。
　・メンブレン、ゲル、ろ紙の重ね方かな？
　　ごめんね。よくわかんない。

(3)また、バンド以外の部分にシミの様な黒点が現れる時がしばしばあります。
　・これはきっとコンタミだね。手垢、唾液、フケみたいな。
　　実験器具はキレイにしてる？　
　　実験は使い捨てのマスク・手袋・ネットキャップを使わないとね。
　　もちろん、器具を洗浄するときもね。
　　清潔感のある美女やイケメンでも、手垢、唾液、フケでコンタミするから十分に気をつけてね。

回答No.3

pinky0714

(3）についてですが、抗体に目に見えないゴミが入っている場合も考えられます。
抗体を遠心して使うのも手だと思います。

回答No.2

owata-www

色々な原因が考えられますが、一番考えられるのは

(1),(2)→ゲルと膜、ろ紙の密着度が十分ではない

(3)→溶液の量や振とうが不十分orすすぎが不十分

でしょう。

お礼

回答ありがとうございます。
(1)(2)はそんな気がします。
(3)も増やしてみます。
まずはご指摘の点を改めてみます。
ありがとうございました。

回答No.1

otx

参考までに
http://www.atto.co.jp/pdf/Tips%20for%20WB.pdf

ここに限らず、一般的に売ってあるプロトコールなどは見ましたか？
トラブルシューティングなど、たくさんあります。
羊土社などの書籍をみてみてください。

お礼

早速の回答、ありがとうございます。
ゲルと膜をもう少し圧接してみようと思います。
今海外滞在中で、羊土社の書籍は手持ちのものしかないためお尋ねさせて頂いたのですが、とても助かりました。
ありがとうございました。