抗体の溶解液

質問

こんにちは。早速質問です。
ヤギ抗IGF-1R抗体という一次抗体を購入したのですが、誤ってｐHが6.4のPBSで溶解してしまいました。
ウエスタンを行っても、非特異も何もバンドが出ないのですが、条件が悪いのか、抗体の活性が落ちているのか分かりません。
ｐH6.4のPBSで溶解すると、抗体の活性は低下してしまうのでしょうか？
ご存知の方がいれば、教えてくだされば助かります。

回答No.2

Dr_Hyper · ベストアンサー

ｐHが6.4のPBSということは、組成が一般的なものではないと言うことですよね。そのPBSでwesternも行っているのでしょうか？
または酸で無理矢理pHを変えているわけですよね。いずれにせよ早急にpHを7.4付近に戻すことをおすすめします。長期間の逸脱したpHがいいわけはありません。精製のときはpH2.5などの条件を用いますが、すぐに中和しますので、だから大丈夫という風には考えない方が無難です。
抗体価が低い抗体はpHなどが酸性に傾いていると著しく反応性が低下する場合があります。また凍結乾燥をして送られてきたものは通常水で溶かす場合が多いと思いますが、ご確認されましたか？
保存のために凍結乾燥をしたばあいは、水分だけをとばしているので、水溶液に戻す場合には水だけでいいのです。

お礼

返事が遅くなって申し訳ありません。回答ありがとうございました。
そのＰＢＳではウエスタンは行っていません。血液塗抹の固定に使っているＰＢＳが同じ棚にあって、間違えてそれを使ってしまいました。
抗体の説明書にはＰＢＳ（ｐＨの記載なし）で溶解するようにと書いてありました。
100マイクロずつに分注してしまったので、ｐＨ測定が厳しい状態です。。。その後の実験では、目的のバンドかは分かりませんが、非特異のバンドも確認できたので、とりあえずこの抗体を使ってみます。
本当に回答ありがとうございました。

回答No.1

geneticist12

>ｐH6.4のPBSで溶解すると、抗体の活性は低下してしまうのでしょうか？

それはないと思います。
免疫グロブリンは大変安定なタンパク質でpHが大きくはずれても不可逆的に変性することはありません。抗体をアフィニティー精製するときは、pH 2や10で溶出するくらいですから、pH 6.4には何の問題もないでしょう。反応させるときはどうせ適当なバッファーに希釈するのでしょうし。

お礼

回答ありがとうございました。
これで、高価な抗体をダメにしていないことが分かったので安心しました。
本当にありがとうございました。