Lowry方のタンパク定量について教えてください。

質問

今、Lowry法でタンパク定量をしているのですが、細胞を96穴プレートに培養し、その細胞を溶かすのにNaOHを使用しています。このNaOHは微量にしか使っていないのですが、それほど重要なのでしょうか。細胞の溶け残りがあるとフォリン試薬を入れたときにあまり色が変化しなかったりするのでしょうか。どなたかお答えいただけると、幸いです。

回答No.1

MIYD

何のタンパク質を測定するためのプロトコルなのかを
考えましょう

培養上清のタンパク質量を測りたい訳ではないですよね

お礼

やっと、解決しました。プレートに試薬を入れた後のボルテックスと遠心が足りなかっただけのようです。お騒がせしました。

補足

私が使っている細胞は活性酸素を出す細胞で、その活性酸素能を薬剤で阻害して、スコポレチン法で細胞が出す活性酸素の濃度を測定し、細胞の活性酸素能がどのくらい低下したかを検討しています。ですので、培養上澄み中に出る活性酸素を計りたいのですが、データに出すには、活性酸素を出すタンパク(細胞中の)1mgからどのくらい活性酸素が出るかに換算しないといけないみたいなのです。
細胞が活性酸素を出した後に、用済みになった細胞がプレートリーダーにかけるときに邪魔にならないように細胞を溶かしきらないといけないので、その溶かすのにNaOHを使用しているのです。そして、溶かした後にC-solutionとフォリン試薬処理してプレートリーダーにかけました。問題は、プレートリーダーにかけると値がばらばらになるのです。プレートの底をよく見ると、細胞のかけらが少し残っているようなのですが、スタンダードのために細胞をいれず、BSAと水のみを入れたプレートも値がバラバラになってしまい、全くスタンダードにならないのです。試薬の調整は間違っていないと思うのですが・・・