Lowry法でタンパクを定量するとき、コンデンスミルク状の沈殿ができて困っています

質問

培養細胞を２*ＴＮＥバッファーで溶解し、あるタンパク質をウエスタンで検出しようとしています。１レーンあたりのアプライ量を等しくしたいので、ローリー法で定量しようとしていますが、コンデンスミルクのような沈殿ができてしまいます（できないときもありますので、このへんがよくわからないんですが・・・）。

定量するときには、タンパクサンプルをmilliQ水で１/２０に希釈してから行っているので、界面活性剤やその他の沈殿しやすそうなものの濃度はかなり薄まっているとは思うのですが、コンデンスミルク状のものができるときがあります。

このままＯＤを測定しても、ちゃんとした値になるはずもないし、ちょっと困っています。自作の試薬で行っています。フェノール試薬のみ、出来合いの製品を購入しました。

この件について、解決策を知っているかたいらっしゃいましたら、教えてください。定量できればなんでもいいです。ローリー法にこだわりはなく、１レーンにアプライする量を調節できればそれでいいんですが。よろしくお願いします。

回答No.1

ADEMU · ベストアンサー

水に対するたんぱくの溶解度が低いのではないでしょうか？
少量の０．１％ＴＦＡ（若しくは酢酸）で一度溶解させてからｍｉｌｌｉＱで希釈してみてはどうでしょうか。