kit primer

質問

TOPO Cloning kit内のprimerを使ってPCRをしようと思っているのですが混合のときの濃度の設定がわかりません。primerの全長は20bpで濃度は0.1μｇ/μlで20です。

回答No.2

Chicago243

>調べて見ると3.2pmolが適正みたいなのですが1ng/microLで足りるでしょうか？

だいたい同じぐらいの濃度になると思います。

補足

primerを1ng/microLに希釈してPCRを行ってみましたがうまくいきません。希釈の仕方がいけなかったのでしょうか？
希釈はこのように行いました。
kit内のprimer(0.1μｇ/μl)から1microLとり、それを99microLのH2Oで希釈。
このうち1microLを使ってPCRを行いました。primerの濃度は終濃度が1ng/microLになるよ希釈するべきでしょうか？
何度も申し訳ありません。

回答No.1

Chicago243

PCRのプライマーはたいてい0.2から0.5microMぐらいで、20merぐらいだと、1ng/microLの濃度になればいいと思います。

補足

調べて見ると3.2pmolが適正みたいなのですが1ng/microLで足りるでしょうか？