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μm単位の生物の分離法について
研究でクラミドモナスとゴニウム、パンドリナを扱うようになったのですが、この3種類が同じ容器に入っていて、比較しながら実験したいので、この3種(各8μm、24μm、20μm)を個別に分けようとしてみたのです。ところがどうもうまくいきません。フィルターがサイズに合うものがなくて、遠心分離なども試して見たのですが、思うようにはいきませんでした。ピペットで顕微鏡を見ながら分けようとしたのですが、それもうまくいきませんでした。(やり方にまずいところがあるかもしれませんが...) 何か良い方法はないでしょうか？ 知っている方おられたら、教えてください。
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- kgu-2
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- protozoa
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今ひとつ分離を行う目的が分からないので、以下、適当に書きます。 おそらく、別々に分離して培養と言うわけには行かない実験なんでしょうね。 分離の目的が単に数を数えるだけなら、形が壊れないか見分けがつく方法で固定して、トーマの血球計算板で、赤血球やら白血球を数える要領で数を数えます。 生きているものを、少数分離したいなら、 僕でしたら、1/5mm程度ですから目に見えない訳ではないですし、三者の泳ぎ方の特徴を見分けた上で、先を細くしたパスツールピペットで金魚すくいします。 難しければ、ホールスライドなどに培養液を少量とって、実体顕微鏡かルーペで覗きながら金魚すくいします(数が多すぎてすくえない場合は、適当に希釈しましょう)。 これは、修行しだいですね。僕は、アメーバ・ゾウリムシ・ミドリムシを、上記の方法で分離した経験があります。 動きが速いようなら、メチルセルロースで動きを遅くするとか。 生きているものを大量に分離したいなら、走性などの生態の違いから大雑把に分離して、はぐれものをピペットで除くなど。 どんな目的で分離するのか、対象の生死は問うのか、どの程度の規模で分離したいのかが分かれば、もっとよい方法も浮かぶやもしれません。 以上、ご参考になれば幸いです。
補足
ご回答ありがとうございます。 参考にさせていだだきます。 目的ですが、これら3種はボルボックス目の動物で、それぞれクラミドモナス様の細胞からなっています。 テーマは単細胞生物から多細胞生物への分化についてということで、実験をしています。 そこでゴニウム(8個)やパンドリナ(8個)をバラバラにしてから、また元に戻すというようなことができないかという実験をしてみたいのです。20μmだから、1/50mmですね。 それで、個別に分けれたほうが、観察しやすいので分離したいのです。だから、生きたままできるのが望ましいです。最終的には3種別々に培養したいのですが・・・
人の血液検査器械で自動血球計算器というのがあります。詳しい構造はわかりませんが、たぶん細い場所を通してそこを通る血球をカウントしているんだと思います。大きさの設定が可変なら使えるかなあと思いますが。でも、器械自体が１００万円を超えます。 モニターで借りてくるか・・・・。
お礼
koumoriyaさん ありがとうございます。 器械は医学部とかにあったりするのかなぁ？ 参考にしてみます。
- anakujira
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それらの生物については，全く知識がありませんが， 密度濃度勾配で分離はできないでしょうか。
補足
それは密度濃度勾配の遠心分離ということでしょうか？ 何度か、ショ糖で濃度勾配を作って遠心分離にかけてみたのですが、どうもそれらしき結果がえられませんでした。 精度を上げるには、濃度勾配を多く作ればいいんでしたっけ？
お礼
protozoaさん、どうもありがとうございます。 何とかなりそうな気がしてきました。 とりあえず'その2'、'その3'で頑張ってみたいと思います。