ベストアンサー 細胞分画法のタンパク質量について! 2010/10/27 09:50 細胞分画法のタンパク質量について! なぜ、細胞分画法で得られた各分画のタンパク質量を測定する必要があるのか教えて下さい。 みんなの回答 （1） 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー c80s3xxx ベストアンサー率49% (1634/3294) 2010/10/27 13:29 回答No.1 タンパク質量が知りたいからでしょう． 質問者 お礼 2010/10/28 00:59 ありがとうございます! 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学化学 関連するQ&A ラット肝の各分画の蛋白質について ラット肝をホモジネートし、核・ミトコンドリア・リソソーム・細胞質分画に分け、核分画の蛋白質量をＢｒａｄｆｏｒｄ法により検出しました。各分画の蛋白質の適正値又は標準値、もしくは基準値が知りたいのですが 蛋白質の細胞分画実験で・・・ 蛋白質（小腸の内膜）の細胞分画を進めるにつれ、酵素活性が下がっていくのはなぜですか？ 私は、各段階での蛋白質の濃度が影響していると考えています。 細胞分画 細胞分画で何かコツはありませんか？ 遠心分離でサイトゾルとミトコンを分けたいです。 チェックはウエスタンでマーカータンパクをやります。 できるだけ簡便にしたいです。 バッファーやホモジナイズ、遠心、もしくはウエスタン等 些細なことでいいのでお願いします。 細胞小器官に含まれるタンパク質の活性の調べ方 現在密度勾配遠心により細胞小器官を分画しています。(使用しているのは神経細胞) 一応スクロースなどを使い細胞小器官に含まれるタンパク質の活性がなくならないようにして分画しているのですが、その活性を調べた方がいいと思い質問させていただきました。 どのような方法がお勧めでしょうか？ちなみに分画はミエリンの比較的多い分画、シナプス小胞の比較的多い分画、ミトコンドリアの比較的多い分画があります。(シナプス小胞の比較的多い分画、ミトコンドリアの比較的多い分画が特に重要です。) どれか一つでも参考になるような方法があれば教えてください。よろしくお願いします。 タンパク質濃度測定法について いつもお世話になります。 タンパク質濃度測定法について質問させてください。 測定するタンパク質はウサギ肝臓ホモジネートより遠心分画法で分離した粗ミトコンドリア分画です。 今までSDS-PAGEのための濃度測定にBCA法を使っていました。 泳動にも問題はありませんでした。 BCAはビアスのキットを使っています。 タンパク標準液も市販のものです。 今回、濃度が濃そうだったのでビウレット法でも試してみたところ、BCA法で31.69ug/ulだったサンプルがビウレット法では121.5ug/ulになってしまいました。 検量線は両方ともリニアにひけています。 タンパクも両試薬ともアルカリ性ですし、きちんと溶けているように思えるのですが・・・ 原因が思い当たる方、そしてどちらが信用がおけるかアドバイスお願いします。 細胞分画の方法で困っています。 初めて質問させていただきます。 培養細胞を核、サイトゾル、膜画分（細胞骨格を含む）に分画する方法を調べていると「Triton X-100で細胞を可溶化させ、不溶化画分を膜フラクションとする」と書かれている論文を見つけました。しかし分画に使用する溶液はTriton X-100とだけ記されておりTriton X-100の濃度やその他の組成が全く記されていません。どなたかTriton X-100を用いて膜だけを分画する手法を知っているなら教えて下さい。 細胞分画で何故核だけ... マウス肝臓で、細胞分画をしました。 SSCを加えた後、ワーニングブレンダーでホモジナイズした後、遠心分離を行いました。 細胞分画では、核が一番先に沈殿し...ということは 分かるのですが、核のみが白い沈殿を作り、 他の細胞質はSSCになじむのでしょうか？ 核は親水性だと思うので、まじりそうな気がして 頭が混乱しててよくわからない文章になっているかも しれません。 回答よろしくおねがいします。 【細胞障害性】たんぱく質量とLDH活性の違い 細胞が障害されると、たんぱく質やLDHが放出されるので、 どちらも炎症性の指標になるとは思うのですが、 両者の違いがよくわかりません。 例えば、 ・たんぱく質量は上がったが、LDH活性は変化しなかった ・たんぱく質量、LDH活性がともに上がった などの場合(実際にこのような状況があるかは分かりません)は それぞれどういうことが言えるのでしょうか。 ご存知の方がいらっしゃいましたら、 どうか御教授願います。 核膜のマーカー酵素あるいはマーカータンパク質 いつもお世話になっています。 細胞分画法を用いて細胞小器官の分画を行っています。 オルガネラ画分に核膜が混入していないことを証明するためのマーカーを探すように上から言われたのですが、GoogleとかMedilineあたりではヒットしてきません。 （おそらく探し方も悪いのですが） マーカー酵素（活性測定）でも、マーカータンパク質（イムノブロッティングで検出）でもどちらでも結構です。 ご存知の方がいらっしゃいましたらご教授願います。 もし分かれば、参考文献も教えて頂ければと思います。 よろしくお願いします。 食品中のタンパク質量の求め方 食品中に含まれるタンパク質量を求める方法を探しています。 ケルダール法以外の方法を知っていましたら、教えてください。 また、ミクロ法、セミミクロ法の違いを教えてくださるとうれしいです。 よろしくおねがいします。 「分子分画法」について教えてください ”分子分画”工程の簡単な説明と、なぜこの方法だとたんぱく質の働きをそのまま保つことが出来るのか？の説明をお願いしたいのですが、、、、 いかがでしょうか？ ちなみに、私は化学に対してまったくの素人です。 宜しくお願い致します。 分画遠心法について（ミトコンドリアからのタンパク抽出） 現在分画遠心法によってミトコンドリア画分とミトコンドリア画分を除いた部分からタンパク質（酵素）を抽出しています。 そこで質問です。大抵の本や文献ではミトコンドリア画分を得るまでショ糖溶液を使用しているのですが、ショ糖溶液でなければならないのでしょうか？私はミトコンドリア画分を得るまでの沈殿などからもタンパク質（酵素）を取り出したいと考えていますので、できれば界面活性剤が入っているリン酸緩衝液を使いたいと考えています。なのでできれば最初からPBで抽出することが可能かどうか知りたいのです。原理としてはどのような溶液でもできそうな気がするのですが… ご存知の方がいらっしゃいましたらよろしくお願い致します。 ホルマリン固定した培養細胞の可溶化 培養細胞をホルマリン固定して観察した後に可溶化したいのですが、いい方法はないでしょうか。可溶化の目的は、総タンパク質量を吸光度にて測定（Lowry法やBCA法）することです。 細胞外に出るたんぱく質 生命科学で 細胞外に出るたんぱく質は 小胞体に入り、ゴルジ体で装飾されて細胞外にでると聞いたのですが そのたんぱく質は遊離リボソームで作られたたんぱく質も含まれているのでしょうか？ 小胞体にはリボソームが着いていてそこからたんぱく質が合成されるので そのたんぱく質だけではないですか？ また粗面小胞体でたんぱく質が合成されるのでtRNAやその合成酵素も小胞体に含まれている ので正しいですか。 よろしくお願いします。 細胞とタンパク質の関係について教えてください 生物の基本知識がありませんが、質問させて頂きます。 細胞の核にDNAの遺伝情報が仕組まれていて、そのコードに従って、アミノ酸を組み立ててタンパク質を作ると理解しています。その作るタンパク質が細胞内に作られるとは考えられないので、何処にそのタンパク質は行き、どの細胞の何の働きに役立つのかが理解できません。例えば筋肉繊維はタンパク質の塊のように考えますが、そのタンパク質が細胞内で、どのように力の細胞連結した効果に役立つのか理解できません。細胞の図解を見ると、その中にタンパク質が働くようなイメージが解説されていないので、DNAコードで生合成するタンパク質は一体どこで何の役目を果たすのかを教えて頂きたくお願いいたします。 Ｔ細胞 ＨＰＬＣ マイクロビーズ 増殖試験 HPLCを用いて蛋白抗原を分画し、Ｔ細胞の反応する分画を取りたいと思います。蛋白のみをビーズなどに吸着させてアッセイしたいのですが、何か良いマイクロビーズがないでしょうか？ 質量分析計(MS)を用いたタンパク質の測定 初歩的な質問で申し訳ありませんが、 質量分析計(MS)で、タンパク質の質量が分かるようですが、タンパク質の種類は数万種類以上あると記載があり、どの様にしてそれらが測定できるのかを教えてほしいのですが？ (1)数万種類以上のすべてのタンパク質の質量が既に既知状態で、それらとサンプルのタンパク質を 同定する方法で決定するのでしょうか？ 素人的には未知のタンパク質があった場合、同定ができないと思うのですが？ (2)タンパク質は20種類のアミノ酸が鎖状に幾つも繋がったもので、その長さは多種と記載があります。 だとすると、タンパク質の分子量は同じで、その構造が異なる場合などないのでしょうか？ (3)MSでは、タンパク質の分子量が僅差であっても正確にそのタンパク質の特定が可能なのでしょう か？ 当方、実際に分析などは行ったことはなく、残念ながらNet上での知識程度しか御座いません。 ご回答のほど、宜しくお願い致します。 細胞周期演習問題：細胞数とたんぱく質量 ある細胞Xの細胞周期は20時間、G1が8時間、S期が4時間を占める。 非同調的に増殖している細胞Xの懸濁培養液の半分を取りDNA合成の特異的阻害薬を加えた。残りの半分にはそのまま何も加えずに、２０時間の培養を続けた。 すると前者の培養液では最終的にM期に入る細胞が見られなくなった。 問１、 細胞Xを20時間培養した時点で細胞数を数えると、DNA合成阻害剤を加えたほうの細胞数は加えないほうの細胞数の何パーセントか？ 問２、 細胞Xを20時間培養した時点で全タンパク質量を数えると、DNA合成阻害剤を加えたほうの細胞数は加えないほうの何パーセントか？ 問２は一回細胞周期が回ってかたや合成がすすみDNA倍加、かたやそのままなので50％という考えで答えを書いたら丸でしたが問１の答えは70％でした。 問１の70％という答えはどのように導出すればいいのでしょうか。 タンパクと細胞の凍結方法の違い タンパク精製を主に実験でおこなっている大学生です。タンパクの凍結保存をする際、細胞の凍結方法と異なることに疑問を抱きました。 タンパクを凍結保存するときは、液体窒素等を使用して急速凍結を行うことが推奨されています。これはゆっくり凍結すると液体が大きな結晶をつくってタンパクの構造を破壊してしまうということでした。しかし、細胞を凍結するときは、凍結保護剤を加え、緩慢凍結法を推奨されております。 凍結保護剤を加えることで氷の結晶化の速度がゆっくりになり大きな結晶ができるのを防ぐということでした。 よく分からないのですが、細胞もタンパクと同様に急速凍結を行うこともあるのでしょうか？細胞の保存というと一般的に凍結保護剤を加えて緩慢凍結法です。逆に精製したタンパクも細胞の保存方法のように保護剤を加えて緩慢凍結をすることがあるのでしょうか？ 細胞はタンパクと違って細胞膜と細胞質からなっているため、細胞内液の状態も考慮するためにこのような保存方法がとられるのでしょうか？ このようにして凍結された細胞内はガラス化しているという文献もあったのですが、急速凍結法（ガラス化保存法）と書いてある文献もありました。原理を考えると急速凍結の方がガラス化していると思うのですが、細胞内もガラス化しているのでしょうか？ 長文になってしまって申し訳ございませんが、タンパクと細胞での保存方法の違いと、ガラス化についてよく分からなくなってしまいました。 どなたかご教授いただけたら大変嬉しいです。 よろしくお願いします。 硫安分画について こんにちは。 タンパク質の硫安分画について質問します。 タンパク質を硫安分画で沈殿させたのですが、沈殿に含まれる硫安の濃度はどうやって求めたらよいのでしょうか？ 沈殿を溶かす溶液の量によって濃度は変化するので、沈殿に含まれる硫安の重量を求めようと思ったのですが、それも分かりません。 加えた硫安の濃度は50％で1Lに対して314ｇの割合です。 調べたのですがよく分からず困っています。 変な日本語で申し訳ないのですがよろしくお願いします。 注目のQ&A 「前置詞」が入った曲といえば？ 新幹線で駅弁食べますか？ ポテチを毎日3袋ずつ食べています。 優しいモラハラの見抜き方ってあるのか モテる女性の特徴は？ 口蓋裂と結婚 らくになりたい 喪女の恋愛、結婚 炭酸水の使い道は キリスト教やユダヤ教は、人殺しは地獄行きですか? カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科（小学校・中学校）化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他（自然科学） カテゴリ一覧を見る あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど
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