DNAの濃度(モル濃度)について教えてください。

質問

DNAの濃度(モル濃度)について教えてください。

先日シークエンスする機会がありました。
プロトコールにprimerは6.4pmolとあったのでPCR用(10μM)を
10000000倍希釈(1pM)にして6.4μl(final volume14μl)使用したところ結果は全滅。

先輩に聞いたところ1μMを6.4μl使えばOKとのことでした。
この数値はメーカーが推奨している、とのことです。
確かにそれで結果は出たのですが、釈然としません。
先輩に聞いたところ「bp数と分子量の関係で・・・」と説明してくれましたが
よくわかりません。

どなたか高校生程度の化学理解力でわかるように教えてください。

回答No.2

Mr_Spock · ベストアンサー

>大文字のMはモル濃度で小文字のmolはモル数、でいいのでしょうか？
そうです。
高校なんかでは、molもMも「モル」と言うようになっていたかもしれませんが、正しくは、molは「モル」、Mは「モラー」(molar)と発音します。
Mはモル濃度（molarity）の単位で、1 Lの溶液に何molの溶質が入っているかを表します。
Mは国際単位系では、正統的ではないけれど慣習的に使用を認めるというような範疇に入っていて、mol/Lを使うほうが望ましいとなっていたと思います。

お礼

ご丁寧にありがとうございました。
解ってたつもりで大きな勘違いをしていました。
これからは自信を持って(?)モル濃度計算ができます。
ありがとうございました。

回答No.1

Mr_Spock

そんなたいそうなことではなく、単純にあなたの計算間違いです。
>プロトコールにprimerは6.4pmolとあったので

これはモル数6.4 pmolを一反応に加えるということです。

>PCR用(10μM)を

これはモル濃度10 uMです。つまり10 umol/L = 10 pmol/uLです。
モル数　6.4 pmolを得るには、この濃度の液を0.64 uLとればよいです。
1 uM = 1 umol/L = 1 pmol/uLに希釈したものならば、当然6.4 uLです。

あなたの希釈した1 pMは、1 pmol/L = 1 amol (atto mol)/uLということです。
これを6.4 uL取っても6.4 amol (pmolの1000000分の1)にしかならず、6.4 pmolを得るには6.4 L必要です。

補足

ありがとうございました。

私はモル濃度とモル数をごちゃ混ぜにしていたのですね。
大文字のMはモル濃度で小文字のmolはモル数、でいいのでしょうか？