限界希釈法による細胞のクローニング

質問

９６穴プレートで限界希釈法による細胞のクローニングを行っているのですが初めての作業でやり方がいまいち分かりません。
１つの穴に細胞が１つ入っているかを確認するのに１穴１穴顕微鏡で確認しているのですが、顕微鏡で探すのに手間がかかり、細胞が冷えてしまいます。
通常どのように確認されているのでしょうか？
経験者の方いらっしゃいましたらお手数ですが、ご教示の程よろしくお願い致します。

回答No.3

utanet

私も同じ作業をしていますが、顕微鏡で探すほかないと思います。
ただ、多少勿体無いとは思いますが、「播種するウェル数/ウェルの枚数」ということで、同じ96ウェルでもたとえば３枚のプレートに32ウェルずつ播種すれば、プレート1枚あたりの確認作業にかかる時間は短縮されます。
また、mippo-さんのやり方では確実に1細胞からの増殖であると判断しかねますのでお勧めしません。

回答No.2

mippo-

私は細胞を播種したら、しばらくほったらかしにします。
数日後、細胞塊(コロニー)がある程度大きくなったところで、
低倍率で顕微鏡観察を行えばすぐ分かります。
プレートに衝撃を与えてしまうと
コロニーが二つになってしまったりしてしまうので、
そっと取り扱うことがポイントだと思います。
ただし、分散しやすい細胞だと適用できないかもしれません。

回答No.1

tarotaroka

私も同じように顕微鏡で１つずつ確認しています。