サンプルバッファー

質問

以前たんぱく質の実験をしたときに、SDS-PAGEを行う前にたんぱく質にサンプルバッファーを加えました。その後、サンプルバッファーで処理したたんぱく質を100℃で処理するのはなぜなのでしょうか？

回答No.1

gori8063 · ベストアンサー

サンプルBufferには恐らく、色素（泳動のトレース用）、糖類（比重を上げるため）、還元剤（メルカプトエタノールかジチオスレイトールなど）、SDSが入っているはずです。

加熱することによりタンパク質を変性させて構造を壊してやり、SDSが全体に付着する、還元剤が全てのS-S結合に行き渡って還元が完全に行われるという効果があります。

お礼

回答ありがとうございました！！
納得しました。

回答No.2

dadachan

参考までに、別にboilする必要があるわけではありませんよ。
私は室温放置数時間でやってました。
boilによって、サンプルバッファー中に溶解しているものが析出する事があったりしたので。

でも、そのような特殊な場合でない限りは、boil5分が手っ取り早いでしょうね。

しっかりと蛋白質とSDSを1:4の割合で結合させて、分子量を正しく出すためですからね。

お礼

回答ありがとうございました。
boilする必要が必ずしもあるとは限らないとは知りませんでした…