RNA抽出
RT-PCRで、各組織でのRNA発現量の定量、比較を行っています
このPCRのときに、RNA抽出物にDNAのコンタミがないかどうかチェックするためにネガコンとしてcDNA作成に利用したRNA抽出物を一緒にPCRを行っているのですが
このRNA抽出物(吸光度で濃度が1,9)にもcDNAのものと同じ位置にバンドが出てしまいます
PCRのプライマーは、イントロンを2ヶ所はさむように設計しているので、RNA抽出物にこのようなバンドが出てしまうのが理解に苦しんでいます
RNA抽出キットはキアゲン社のものを使っています
精製度が高いということなのでDNase処理は行っていません
脳、肺ではこのRNA抽出物ではバンドが出ず、発現が高いと思われる肝臓でバンドが見られる(2回RNA抽出を行って2回とも)ので、このことも関係しているのでしょうか??
このバンドがなくなるまで定量はできないのでしょうか?
アドバイスをいただけたら幸です