ベストアンサー 核酸抽出:RNAとDNAの違い 2010/02/02 18:04 核酸を精製・抽出する際、DNAは中性フェノールを用いるのに対し、RNAは酸性フェノールを用いるのは何故ですか? 特に、DNAが中性フェノールを使う利点を詳しく教えてください。よろしくお願いします。 みんなの回答 (2) 専門家の回答 質問者が選んだベストアンサー ベストアンサー otx ベストアンサー率44% (256/576) 2010/02/03 15:46 回答No.2 >中性フェノールでは水層にDNAとRNAの両方が残ることにはならないのでしょうか?中性フェノールではどのようにDNAを抽出できるのかがまだ理解できません。 RNA精製(AGPC法)における酸性フェノールの意味はご存知(?)なので割愛します。 もともと、DNA精製におけるフェノール処理の目的は「タンパク質の除去」です。 なので、 >中性フェノールでは水層にDNAとRNAの両方が残ることにはならないのでしょうか? なります。っていうか、こうなってあたり前なのです。 DNA精製でRNAを除きたい場合は、RNAを分解するRNaseAなどを加えます。 質問者 お礼 2010/02/03 16:37 回答ありがとうございます。 そういうことだったのですね!ずっとそこが疑問だったのでとてもスッキリしました! こんな低レベルな質問にお付き合いいただいて本当にありがとうございます。また何か機会があればよろしくおねがいいたします。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 その他の回答 (1) teru-arai ベストアンサー率74% (40/54) 2010/02/03 02:24 回答No.1 不思議に思わなかったですか? 組織や細胞から酸性フェノール(いわゆるAGPC法)を用いるとRNAだけが取れてくる、DNAはどこへいっちゃったって? DNAは水相になければフェノール相へ行ってしまう(もちろん、水相にもコンタミしてきますけどね)のは、理の必然ですね。リボースとデオキシリボースのOHの数の差一つで、RNAとDNAの酸性溶液中での振る舞い、水相とフェノール相のどちらに分配されるかが、分かれるそうです。 DNAに酸性フェノールはうまくないのです。RNAは酸性フェノールの方がDNAのコンタミを少なくできます。 質問者 お礼 2010/02/03 13:36 回答ありがとうございます。私は遺伝系へ進もうと思って勉強をしているものですが、まだまだ知識が浅く、わからないことだらけです。 RNAを酸性フェノールで抽出すれば水層にRNAを残すことができる、ということは理解出来たのですが、中性フェノールでは水層にDNAとRNAの両方が残ることにはならないのでしょうか?中性フェノールではどのようにDNAを抽出できるのかがまだ理解できません。 的外れな質問かもしれませんが、お時間がありましたら教えてください。よろしくおねがいします。 広告を見て全文表示する ログインすると、全ての回答が全文表示されます。 通報する ありがとう 0 カテゴリ 学問・教育自然科学生物学 関連するQ&A DNAとRNAのどのような性質に違いから水溶性になるのか,脂溶性になるのかがわかりません. 大学の実験でノーザンハイブリダイゼーションをやったのですが,核酸を抽出するときにDNAとRNAで抽出に必要なpH条件が異なる原因がわかりませんでした. 具体的には,それぞれの核酸抽出用の生体試料に試薬を加えて遠心すると,DNA抽出ではpH9の下で上清にDNAが含まれ,RNA抽出ではpH4の下で上清にRNA,有機層にDNAが含まれる,ということです. ウェブで色々調べたのですが,「DNAはアルカリ性で,RNAは酸性の水溶液で水溶性になる」ということだけがわかり,具体的に「どのような化学的性質の違いにより,溶け方の違いが生じるのか」ということはわかりませんでした. また,DNA抽出では上清にRNAも含まれている気がするのですが,RNAははいっているのでしょうか?また,入っているとして,ハイブリの結果に影響はないのでしょうか? どなたかこの辺の事に詳しい方,教えてください.お願いします. RNAの単離について(フェノール抽出) DNAはフェノールにとけて、RNAはフェノールの溶けないのはなぜなんでしょうか?また、最終的に、RNAをエタノールで沈殿させ、抽出させるのですが、なぜ、RNAはエタノールで沈殿するのでしょうか?回答よろしくお願いします。 核酸 核酸の抽出と定量の実験(基礎技術の習得が目的)を行いました。 DNA、RNA量をもとめた後に、RNA/DNA比をもとめるよう指示されました。この比は何の目的で出すのですか?この比を出すと何がわかるのですか?誰か教えてくださ~い!簡単な説明で結構です! あと、核酸の抽出と定量を行うことによって、どんなことに応用できるのですか? 質問多くてスミマセン(>_<) これらのことに詳しい方、よろしくお願いします! 天文学のお話。日本ではどのように考えられていた? OKWAVE コラム AGPC法の原理 AGPC法でRNAを抽出する際に、RNAが水層に、DNAがフェノール層に移行する理由は一般的にリボースの-OH基に注目して述べられていますが、以下のような記述を見つけました。 「ただ、そのことは、RNA の方が DNA よりも親水性が強い ことを示してはいるものの、”酸性の条件下で” フェノール/クロロホルム抽出をしたときに DNA が有機溶媒層に行くことの説明としては不十分です。実際、中性でフェノール/クロロホルム抽出を行うと DNA は水溶液層に行きます。なぜ ”酸性” だと DNA が有機溶媒層に行って RNA が水溶液層に行くのか」 考えてみたのですが、他になにも思い当たりません。 教えてください。 またクロロホルムをなぜ添加するのかも教えていただければ助かります。 大腸菌のRNA,DNA同時抽出について こんにちは。初めて質問させていただきます。 現在、大腸菌のTotal DNA, Total RNAを行っております。 現在、RNAはHot phenol法で行っているのですが、この方法で、RNA, DNAを分離して両方回収できないでしょうか。 Hot phenol法では、water-saturated phenolを使っているので、水層にはRNA、フェノール層には、DNAが来ているはずですが、フェノール層からDNAが回収できればいいと思っております。 似た方法であるIsogenのプロトコルを見ると、フェノール層にエタノールを入れ、沈殿させていますが、これでDNAは沈殿するのでしょうか?一般的に塩がないとDNAは沈殿しないといわれていますが、フェノール層のDNAも沈殿するのでしょうか。 また、Hot phenol法以外にも。DNA, RNAを分離してそれぞれ回収できる方法があれば教えていただけるとありがたいです。 DNAとRNA 核の中で合成され、核の外に出てはたらく。 この記述がDNA、RNAにあてはまるか?という問題なのですが、 RNAが核の中で合成されること以外、テキストで調べても載っていませんでした。 両方とも核酸なのはわかるんですが、DNAの合成場所と両者がはたらく場所って、どこなんでしょうか。 RNA抽出 RT-PCRで、各組織でのRNA発現量の定量、比較を行っています このPCRのときに、RNA抽出物にDNAのコンタミがないかどうかチェックするためにネガコンとしてcDNA作成に利用したRNA抽出物を一緒にPCRを行っているのですが このRNA抽出物(吸光度で濃度が1,9)にもcDNAのものと同じ位置にバンドが出てしまいます PCRのプライマーは、イントロンを2ヶ所はさむように設計しているので、RNA抽出物にこのようなバンドが出てしまうのが理解に苦しんでいます RNA抽出キットはキアゲン社のものを使っています 精製度が高いということなのでDNase処理は行っていません 脳、肺ではこのRNA抽出物ではバンドが出ず、発現が高いと思われる肝臓でバンドが見られる(2回RNA抽出を行って2回とも)ので、このことも関係しているのでしょうか?? このバンドがなくなるまで定量はできないのでしょうか? アドバイスをいただけたら幸です TrizolによるRNA抽出 人の組織からTrizolによるRNA抽出をしています。このあとcDNAライブラリーを作りたいのですが、Trizolでは精製が不十分なものでしょうか。Qiagenのkitでclean upをすべきと書いてあるものもあります。A260/280は1.8を超える場合もあり、1.65程度のこともあり…。精製の際にはDNaseを使うべきなのでしょうか。 尚吸光度でDNAも計ると同じような値が出てきますが、吸光度で区別は可能なのでしょうか? RNAの抽出実験 大学の実験で動物の細胞からRNAの抽出を行いました。 webで検索したところ、DNAとRNAは酸性の環境にしてやるとDNAとRNAの構造の違いから分離することができることが分かりました。 僕が大学で行った実験ではTripure Isolation Reagentという試薬を使用しました。また、その実験では特にpHを調整しませんでした。 ということは、Tripure Isolation Reagentという試薬は酸性なのでしょうか? Tripure Isolation Reagentについて検索をかけたのですが、よくわかりませんでした。 みなさん回答お願いします。 DNAとRNAの違い(TがUになってる事ではない) RNAにはメッセンジャーRNA(mRNA)と転移RNA(tRNA)、そしてリボソームRNA(rRNA)があるそうですね。mRNAはDNAの情報を鋳方として核内で合成され、その遺伝情報を受け取って細胞質に移動し、リボソームと結合する(マイペディアより)……とありますが、要はRNAは全体としてDNAの情報を受け取ってそこからさまざまなタンパク質合成をしてるんですよね。 しかし、RNAは「リボ核酸」と和訳されるようにDNAと同じような核酸の塊ですよね。でも上記の話を考慮すると、DNAは設計図、RNAはつくる側、という気がします。この見解はあっていますか?あと、mRNAが持ってる遺伝情報をtRNAがリボソームへ持っていくときのその「遺伝情報」とはあくまでDNAの情報のことですよね? 紛らわしくていつもこんがらがります 核酸の濃度測定 核酸の濃度測定 DNAやRNAの吸光度を測定したあとに核酸の精製度を260nm/280nmで計算すると思うんですが、その値が2.0を超えるとどういうことになるのですか(一般的に1.8~2.0が高精度といわれますが)。 超高精度になるんですか?それともエラーなんですか? DNAとRNAの存在比 大学の実験でウシの肝臓を使って、DNAとRNAの抽出と定量を行いました。実験結果ではDNAとRNAの存在比が1:2になりました。 この結果が正しいのかどうかを知りたいのですが・・・ DNAとRNAの存在比について分かる方がいらっしゃれば、教えてください。 日本史の転換点?:赤穂浪士、池田屋事件、禁門の変に見る武士の忠義と正義 OKWAVE コラム RNA精製度について 皆様にお聞きしたい事があります。 先日、シロイヌナズナからtotalRNAを抽出し、 RNAのpurityをA260/A280を測定することで見積もりました。 数値は、1.0と恐ろしく低かったのですが、この理由として、 (1) RNAの精製が甘く、タンパクが混在している (2) RNaseにより、核酸が分解された 可能性を指摘されました。 A260は、ヌクレオチドの塩基部分の吸収であるので、 核酸が分解していても、変化しないように思うのですが、これは(2)は本当でしょうか。 RNA抽出 乳酸菌に対してノーザンによりmRNAの定量を行おうと思っています。そのためのRNA抽出を行った際に、RNAが抽出できたかどうかを確認するにはどうしたらいいのでしょうか? DNA抽出 DNA抽出に関して DNA抽出の実験を行ったのですが、今回はいつもと違いフェノールを混和後に上澄みを取る際に、どうしても上澄みを半分程度吸い取っただけで、下にあるタンパク質?(白だったり黒だったりの塊は全てタンパクだと考えてよいのでしょうか?)がチップに吸い込まれてしまいました。今までずっと同じ方法でやってきたのですが、これだけタンパク質がゆるかったことは初めてです。操作ミスの可能性は低いと思います。 また、その中の1.2個だけはいつもの様に回収できたサンプルもありました。 いつもと様子が異なっていた点は、上澄みのDNAがものすごくネバネバとしていたことです。いつもならチューブの中で切れるのですが、今日はチップ捨てまで伸びてきました。 フェノールの後もエーテルで処理するのですが、その際もいつも以上にDNAがネバネバしていました。 今日の実験では何が悪かったのでしょうか? DNAの状態にもよるのでしょうか? 何か心あたりのある方いましたら教えてください。 また、今回の抽出ではサンプルによっては確実にタンパク質(白のかたまり)を吸い取ってしまったと思います。 その場合だと、その後の実験(PCRだったり、制限酵素処理だったりと)悪影響で実験が上手くいかないことになるのですか? BacteriaのRNA抽出に関する質問です。 BacteriaのRNA抽出に関する質問です。 培養した菌体のcellからRNAをISOGENで回収→DNase処理→DNase失活→Kitで精製しているのですが、最終回収物を電気泳動するとスメアしています。 同様の方法で以前行ったときはそのようなことは一切なかったのですが・・・。 単純にクロモソーマルDNAが分解過程にあってスメアしているだけなのでしょうか? 仮にDNaseの量や反応時間を伸ばしたとしてRNAの純度やRNA自体の分解に影響はないのでしょうか? 時間もなく非常に焦っています。 ご回答いただければ幸いです。 DNA抽出 DNA抽出がうまくいきません。非フェノール法です。 抽出はできるのですが、目的量まで抽出できない状況です。 抽出方法で注意すべき点などを教えていただきたいです。 自分はボルテックスにかけるタイミングなどが関係するのではと思っているのですが。 ゲルからの DNA 抽出 ふと思いついたのですが、PCR で増やした DNA のある領域を電気泳動し、(非特異的な増幅が見られる場合などに)ゲルから目的の領域のバンドを切り出して、そこからキアゲンの DNeasy Kit で DNA を精製することってできるんでしょうか?勿論フェノール→フェノクロで精製するのが定石だとは思うのですが…もし試したことのある方がいらっしゃいましたら教えてください。 RNA抽出 初歩的な質問でお恥ずかしいですが、RNA抽出について教えてください。 RNAisoを使って抽出しているのですが、このRNAisoは一体何を含む試薬なのでしょうか? ホモジナイズした後にクロロホルムを加える意味はなんですか? 遠心すると、水層と有機層に分かれますよね。 でも、クロロホルムは有機層に含まれますよね?しかし、私はRNAisoはフェノールだと思っていたので、これも有機層に含まれますよね? すると、水層はいったいどこから現れたのか・・・考えていたらよく分からなくなってしまいました。 とりとめのない文章になってしまいましたが、 (1)クロロホルムの役割 (2)水層はどこからきたのか を教えてください。 RNAの構造について RNAリボ核酸は、DNAに比べて低分子の化合物なのですか。 分子量なども分かりましたら教えてください。 注目のQ&A 「You」や「I」が入った曲といえば? Part2 結婚について考えていない大学生の彼氏について 関東の方に聞きたいです 大阪万博について 駅の清涼飲料水自販機 不倫の慰謝料の請求について 新型コロナウイルスがもたらした功績について教えて 旧姓を使う理由。 回復メディアの保存方法 好きな人を諦める方法 小諸市(長野県)在住でスキーやスノボをする方の用具 カテゴリ 学問・教育 自然科学 理科(小学校・中学校)化学物理学科学生物学地学天文学・宇宙科学環境学・生態学その他(自然科学) カテゴリ一覧を見る OKWAVE コラム 突然のトラブル?プリンター・メール・LINE編 携帯料金を賢く見直す!格安SIMと端末選びのポイントは? 友達って必要?友情って何だろう 大震災時の現実とは?私たちができる備え 「結婚相談所は恥ずかしい」は時代遅れ!負け組の誤解と出会いの掴み方 あなたにピッタリな商品が見つかる! OKWAVE セレクト コスメ化粧品 化粧水・クレンジングなど 健康食品・サプリ コンブチャなど バス用品 入浴剤・アミノ酸シャンプーなど スマホアプリ マッチングアプリなど ヘアケア 白髪染めヘアカラーなど インターネット回線 プロバイダ、光回線など
お礼
回答ありがとうございます。 そういうことだったのですね!ずっとそこが疑問だったのでとてもスッキリしました! こんな低レベルな質問にお付き合いいただいて本当にありがとうございます。また何か機会があればよろしくおねがいいたします。