SDHに対する阻害剤の効果を検討するために、下記の反応系においてSDH

質問

SDHに対する阻害剤の効果を検討するために、下記の反応系においてSDH活性を求めた。15分後に反応を止め、酢酸エチルを3ml加え、INTH₂を抽出した。抽出した酢酸エチル1.8mlを取り、厚さ2cmのキュベット中で吸光度を測定した。INTのミリモル吸光度は20とする。

【反応系】
120mM　Na-P　480μL
ミトコンドリア画分(60μg)　120μL
0.25％　INT　400μL
蒸留水　100μL
240mM　コハク酸ナトリウム　100μL

【吸光度】
コハク酸(－)、阻害剤(－)　0.127
コハク酸(－)、阻害剤(＋)　0.147
コハク酸(＋)、阻害剤(－)　0.607
コハク酸(＋)、阻害剤(＋)　0.267

この時の、反応15分後におけるコハク酸の減少率は？

という問題です。

ずっと考えていましたが、わからず・・・・どなたかお願いします。

回答No.1

c80s3xxx · ベストアンサー

ふだんは生物カテは見ないのですが，気になって覗きに来ましたｗ

まずINTは酸化剤で，SDHの存在下でコハク酸に還元されてINTH2になる．1分子のコハク酸から1分子のINTH2が生成．すると，最終的に分光光度計で測定したINTH2がコハク酸の分解量と一致する．

抽出率とかのデータがないので，酢エチで100%抽出できたとする．INTH2 (INTじゃないよ) のミリモル吸光係数 (吸光度じゃないよ) が 20 (単位が明記されていないので mmol-1L cm-1 と想定）すると，測定された吸光度に対応する INTH2 濃度は A = εcL より計算できる．ただし，対照実験の結果を差し引いてやらないといけない．
阻害剤を含まない場合，コハク酸のない(つまり反応しない)場合のINTH2生成量は，次のようになる．
まず，コハク酸を入れたときと入れないときの吸光度の差を取る．0.607-0.127=0.480 これが生成した正味のINTH2による吸収と考える．
測定した酢エチ溶液の中での INTH2 の濃度は A = εcL より 0.480÷(20×2) = 0.0120 mmol/L．
もとの反応系の全体積は 480 + 120 +400 + 100 + 100 = 1200μL = 1.2mL．ここから抽出されて3mLに移した結果が 0.0120 mmol/L なのだから，もとの反応液中での INTH2 濃度は 0.0120×(3/1.2) = 0.0300 mmol/L．そして，これだけコハク酸が酸化されたことになる．
さて，反応開始時のコハク酸濃度を見ると，240mmol/L×(100/1200) = 20 mmol/L である．ここから15分後に0.0300mmol/L だけ減少したことがわかったのだから，減少率としては (0.0300/20)×100 = 0.15%である．