タンパク質濃度を求める際に吸光度を用いて求める方法と

質問

タンパク質濃度を求める際に吸光度を用いて求める方法と
Biuret法がありますが、この両方測定方法で
利点や欠点があれば教えてください。お願いします。

回答No.1

sewingcough

紫外吸光度（UV）の一番の利点は簡便さでしょう。
紫外吸光光度計にサンプルを入れるだけで測定できます。
感度もそれなりにあって、数十ug/mL程度でも測定可能です。
（※この辺はトリプトファン・チロシン残基数にもよりますが）
この点、Biuret法は硫酸銅水溶液を加える手間があり
感度も低く下が数mg/mL程度、上も高々数十mg/mL程度と
狭い範囲の濃度でしか使えません。
測定したサンプルは、UVなら再利用も可能ですが
Biuret法では再利用するのはちょっと難しそうです。
サンプルを再利用しない場合を考えても、
例えば最近はナノドロップなど少量計測の機器があるため
UVならば1マイクロリットル程度の量で計測可能で、
サンプルのロスを最小限に抑えることができます。

ただし、UV吸光度はタンパク質がトリプトファンかチロシンを
持たなければなりませんのでどんなタンパク質でもUVで
というわけにはいきません。
そういった場合は別の方法で濃度を求める必要があります。
これに対してBiuret法はペプチド結合があれば測定可能です。
ですので全てのタンパク質で濃度を求めることができます。
また、溶液がタンパク質以外にも280nmに吸収を持つ場合、
例えばDNAなどをタンパク質溶液中に含む場合などは
UVでタンパク質濃度を求めることができません。
こういった場合も別の方法を用いるわけですが、
Biuret法はこの点でも優れており、
タンパク質以外の夾雑物の影響をほとんど受けません。

しかし実際には、Biuret法はあまり用いられることはなく、
論文などでUVの使えないタンパク質濃度を定量する場合
BCA法かBradford法あたりで定量することが多いと思います。