RNA抽出

質問

初歩的な質問でお恥ずかしいですが、RNA抽出について教えてください。
RNAisoを使って抽出しているのですが、このRNAisoは一体何を含む試薬なのでしょうか？
ホモジナイズした後にクロロホルムを加える意味はなんですか？

遠心すると、水層と有機層に分かれますよね。
でも、クロロホルムは有機層に含まれますよね？しかし、私はRNAisoはフェノールだと思っていたので、これも有機層に含まれますよね？
すると、水層はいったいどこから現れたのか・・・考えていたらよく分からなくなってしまいました。

とりとめのない文章になってしまいましたが、

(1)クロロホルムの役割
(2)水層はどこからきたのか

を教えてください。

回答No.1

Mr_Spock · ベストアンサー

おそらくマニュアルに参考文献が載っていると思いますが、
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2440339

酸性フェノールとグアニジン・チオシアネート溶液の混合液です。そのままでは単一相で混じり合っていますが、クロロフォルムを加えることで極性の差が大きくなって、有機溶媒層と水層（グアニジン・チオシアネート水溶液）に分かれます。
グアニジン・チオシアネート溶液（変性剤）でホモジナイズしてから酸性フェノールを加えて抽出する方法（APGC法）の改良法です。

お礼

ありがとうございます！
こんな親切な論文があるとは知りませんでした。次からは初歩的なことも論文検索してから質問するようにします。

グアニジン・チオシアネートが入っていて水層となるんですね！たしかRNaseなどを変性させるんでしたよね？
大変勉強になりました。ありがとうございました。