同一動物種の二重染色

質問

凍結切片を二重染色しようとしたら、二つの一次抗体の動物種がおなじでした、二重せん染色はできませんか？

回答No.3

guragura77

Zenon標識ってやつだとラットは無理かもしれませんが、アミノ基に共有結合させるタイプのラベリングキットなら問題なく使えるはずです。

回答No.2

Dr_Hyper

どちらか一方の一次抗体をできればAlexa488のような蛍光強度の強い色素で標識します。インビトロジェン（molecular probe社）から簡単なラベリングキットがでてますから簡単にできます。このときでラベルするのは抗体価の強いものにします。2次抗体はシグナルを増強させる意味もありますので、弱い方をラベルしてしまうと、ラベルした方が検出できなくなってしまう場合がありますから。で、抗体が準備できたらラベルしていない方のみで一次抗体、二次抗体処理してください。その後今回ラベルした抗体で染色します。もし最初の染色した像がぼやけるようでしたら、１％PFAでラベルした抗体で染色する前（最初の抗体で染色が終わった後）簡単に再固定します。

補足

インビトロジェンでしらべたところ、マウスとラビットのものにかしか標識できないようです。ratなんですよ。

回答No.1

MIYD

それぞれの一次抗体を標識すればできます
隣同士の切片をそれぞれ染めて、並べて見せると大体の局在がわかります

お礼

ありがとうございました。一次抗体を標識してみます。
隣同士をそめて並べるという手もいいですよね、それで納得してもらえるといいんですけど、
ありがとうございました