酵素阻害剤のKi値の求め方

質問

酵素（セリンプロテアーゼ）阻害剤のKi値の求め方を教えてください。酵素量・反応時間を一定にして低分子阻害剤の濃度をふってIC50値は求めたのですが、このほかにどんな実験を行ってどのような計算からKi値を求めればよいのでしょうか？できれば解説しているサイトも教えてください。よろしくお願いします。

回答No.2

rei00

生化学の教科書は御覧になっているとの事ですので，基礎的な事は省略いたします。

　Ki 値（阻害定数）を求めるには，２通りの方法があります。

【Lineweaver－Burk プロット】
　阻害剤が存在しない状態で，基質濃度を変えて反応速度を測定し，反応速度の逆数を基質濃度の逆数に対してプロットします（Lineweaver－Burk プロット）。

　同様に阻害剤が存在する状態（複数の阻害剤濃度を使用するのがベター）で Lineweaver－Burk プロットを書きます。

　上記のプロットを同じ紙に書いた場合の直線の交わり方から，阻害様式が求まります。

　Lineweaver－Burk プロットの傾きを求め，阻害剤濃度に対してプロットすると直線になります。直線のｘ切片（ｘ軸との交点）が -Ki になります。

【Dixon プロット】
　反応速度の逆数を阻害剤濃度に対してプロットします（Dixon プロット）。直線になるはずです。

　基質濃度を変えて測定を行ない，各データを同時にプロットすると１点で交わります。この点のｘ座標が -Ki 値です。

　いかがですか。解り難いかと思いますので，参考 URL のページ（酵素反応速度論）の図なども御覧下さい。より詳しくは，酵素に関する実験書の類を御覧になる事です。

参考URL：

http://biomol.gifu-u.ac.jp/~molbiochem1/practicum/kinetics.html

回答No.1

kgu-2

図書館で、大学レベルの生化学の教科書を読まれると、競争阻害(私は、拮抗阻害と教わった)など、阻害の形式について書いてあります。

　それをお読みになれば、あとは数学の問題です。私の大学の生化学の時間に、Ki値をもとめるライン-ユーバーバーグのプロットを講義を聞きました。IC50を求めることができる設備がおありなら、授業も受けておられるのではと想うのですが。式を書いても、お役には立たないと想います。
　企業の方なら、周囲には訊ねにくいかもしれません。そのときは、再度ご質問を。

補足

早速の回答ありがとうございます。実はその・・・企業に勤める者でして・・・まさに周囲は知っているものと思っているのです。生化学の教科書（みたいなもの）も斜め読みしたことはあるのですが、どうも机上の空論みたいなところがありまして、実際の実験結果からどのように導き出すかを知りたかったのです。また、そのためにどのような実験を組むべきかも。もう一度教科書を読んでみます。